一、Enhanced anti-inflammatory effects by steroids in a porcine sepsis model（论文文献综述）
厉瑶,陈红波[1]（2021）在《系统性红斑狼疮糖皮质激素抵抗的机制研究进展》文中提出SLE是一种自身免疫病, 糖皮质激素（GC）是治疗SLE的主要药物, 糖皮质激素抵抗是临床GC治疗疗效差的主要原因。本文总结并分析了SLE糖皮质激素抵抗的机制, 主要从糖皮质激素受体（GR）水平相关和非糖皮质激素受体水平相关两个方面的影响因素进行总结阐述。从GR水平相关因素分析发现, 11β-羟类固醇脱氢酶异常、多药耐药基因1及其编码的P-糖蛋白异常、热休克蛋白90异常从GR前水平导致GC抵抗, GR基因缺陷和GR基因表达异常从GR水平导致GC抵抗, 而NF-κB、活化蛋白-1等转录因子产生异常变化则从GC受体后水平对GC抵抗产生影响;从非GR相关因素水平分析发现, 巨噬细胞迁移抑制因子、辅助性T细胞17、Toll样受体9也与GC抵抗密切相关。对这些不同机制的研究, 为早期临床诊断GC耐药, 改善GC抵抗, 提高GC灵敏度提供可靠的理论依据, 通过研究阻断这些潜在机制来逆转GC抵抗, 寻找有效的临床替代治疗方案。
徐海博[2]（2021）在《杨梅素对脓毒症相关急性肺损伤保护作用与机制的研究》文中研究说明
唐欣[3]（2021）在《细胞色素P450 1A1对巨噬细胞中一氧化氮生成的影响》文中进行了进一步梳理目的:研究细胞色素P450 1A1（CYP1A1）对脂多糖（LPS）诱导的活化巨噬细胞中一氧化氮的生成的影响。方法:1.取10只野生型C57BL/6小鼠,提取并体外培养其原代腹腔巨噬细胞（Peritoneal Macrophages,PMs）,分为LPS 0h对照组、LPS 2h组、LPS 6h组、LPS 12h组（LPS终浓度为10mg/L）,采用实时荧光定量PCR（Real Time quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-qPCR）检测PMs中CYP1A1的基因表达情况,采用蛋白质印迹法（Western blot,WB）检测PMs中CYP1A1蛋白的表达情况。探究CYP1A1在LPS诱导的炎性巨噬细胞中的变化。2.构建CYP1A1过表达、表达阴性对照载体的RAW264.7细胞株,分为CYP1A1/RAW组及NC/RAW组,通过倒置荧光显微镜检测增强绿色荧光蛋白（Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP）的表达情况,采用RT-q PCR和WB法验证CYP1A1基因及蛋白是否过表达。3.体外培养CYP1A1过表达、表达阴性对照载体的小鼠巨噬细胞株RAW264.7（分别简写为CYP1A1/RAW、NC/RAW）,分为CYP1A1/RAW+LPS组、NC/RAW+LPS组、CYP1A1/RAW+PBS组、NC/RAW+PBS组,分别用LPS（LPS终浓度为10mg/L）及等体积PBS刺激上述细胞,采用RT-q PCR检测上述细胞中i NOS的基因表达情况,采用Griess法检测细胞培养上清中一氧化氮（Nitric Oxide,NO）的水平,采用WB检测诱导型一氧化氮合酶（inducible Nitric Oxide Synthase,i NOS）蛋白表达以及激活蛋白-1（Activator Protein-1,AP-1）磷酸化水平情况。探究CYP1A1对LPS诱导巨噬细胞生成NO的影响作用。4.取小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞传代培养,分为单独LPS刺激组（LPS终浓度为10mg/L）、单独12（S）-羟基二十碳四烯酸[12（S）-Hydroxyeicosatetraenoic acid,12（S）-HETE]刺激组[12（S）-HETE终浓度为100 nmol/L]、LPS+12（S）-HETE刺激组以及空白对照组,采用RT-q PCR检测上述组别细胞中i NOS的m RNA表达,采用Griess法检测细胞培养上清中NO含量,观察CYP1A1对LPS诱导巨噬细胞生成NO的影响是否与12（S）-HETE有关。5.构建并鉴定过表达CYP1A1基因且突变CYP1A1羟化酶活性位点的RAW264.7细胞株（CYP1A1mutant/RAW简写为CYP1A1m/RAW）。体外培养CYP1A1/RAW及CYP1A1m/RAW细胞,将其分为CYP1A1m/RAW+LPS组、CYP1A1/RAW+LPS组、CYP1A1m/RAW空白组、CYP1A1/RAW空白组,分别给予或不给予LPS（LPS终浓度为10mg/L）刺激,完毕后检测细胞中i NOS的m RNA表达及细胞培养上清中NO含量。观察CYP1A1羟化酶活性是否参与其对LPS诱导巨噬细胞中NO生成的调控。结果:1.与LPS 0h对照组比较,LPS 6h及12h组PMs细胞中CYP1A1 m RNA表达显着升高,CYP1A1的蛋白水平也相应增强,说明LPS诱导的活化巨噬细胞中CYP1A1表达水平明显上调。2.获得稳定过表达CYP1A1的RAW264.7细胞株后,用倒置荧光显微镜观察显示转染成功,同时RT-q PCR和WB的检测结果表明,在相同的时间点,与NC/RAW组细胞相比,CYP1A1/RAW组细胞的CYP1A1 m RNA和蛋白水平均显着升高。3.与NC/RAW+LPS组相比,CYP1A1/RAW+LPS组细胞中i NOS m RNA的表达水平及NO的生成水平均显着增加,与此同时,细胞中AP-1磷酸化水平和i NOS蛋白水平也显着增强,提示CYP1A1可能通过活化AP-1/i NOS通路以促进NO的生成。4.单独给予LPS或LPS联合12（S）-HETE刺激RAW264.7细胞株后,与单独LPS刺激组相比,LPS+12（S）-HETE刺激组细胞中i NOS的m RNA表达和NO的生成并无统计学差异,说明CYP1A1对巨噬细胞生成NO的调控作用与其致炎代谢产物12（S）-HETE无关。5.CYP1A1m/RAW细胞较CYP1A1/RAW细胞中CYP1A1羟化酶活性显着降低,与CYP1A1/RAW+LPS组相比,CYP1A1m/RAW+LPS组中i NOS的m RNA表达及NO的生成无显着差异,说明CYP1A1对NO的调控也不是通过其羟化酶活性而实现。结论:1.LPS可使巨噬细胞中CYP1A1表达水平显着上调。2.CYP1A1过表达可能通过AP-1/i NOS通路促进LPS诱导时巨噬细胞中NO的生成。3.CYP1A1对于巨噬细胞生成NO的调控作用与CYP1A1羟化酶活性及其致炎代谢产物12（S）-HETE无关。
曹波[4]（2021）在《三七皂苷R1对脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用研究》文中研究指明
陈宇婷[5]（2021）在《5-HT3受体拮抗剂与肝衰竭患者预后的相关性研究》文中研究指明
刘丹丹[6]（2021）在《基于定量化学蛋白质组学研究雷公藤红素抗缺血性脑卒中的靶点》文中研究指明实验目的:本研究从细胞水平和动物水平,基于合成的雷公藤红素探针（celastrol-prob,cel-p）,联合串联质谱标签（Tandem Mass Tag,TMT）标记、细胞热转变分析（Cellular Thermal Shift Assay,CETSA）、免疫荧光（immunofluorescence,IF）、蛋白免疫印迹（western blotting,WB）等实验技术研究了活性天然产物雷公藤红素（celastrol,cel）对体内外脑缺血再灌注（ischemic-reperfusion,I/R）损伤的神经保护作用,并探索了其可能的靶点及机制,为合理开发利用天然产物celastrol提供了有力的科学支撑。实验方法:细胞水平1.提取原代新生Sprague-Dawley大鼠皮层神经元细胞体外培养并通过IF方法检测其纯度。建立原代神经元细胞氧糖剥夺（oxygen glucose deprivation,OGD）模型体外模拟脑I/R损伤,并用cell counting kit-8（CCK-8）方法确立OGD模型的最佳造模时间。采用CCK-8方法确认celastrol及合成的cel-p对神经元细胞的半数抑制浓度（50%inhibiting concentration,IC50）、是否具有体外神经保护性、最佳给药剂量及给药时间。2.采用 SDS polyacrylamide gel electrophoresis（SDS-PAGE）凝胶电泳方法,研究cel-p对原代神经元细胞的蛋白质组反应谱和生物结合效率,并验证是否与母体化合物celastrol竞争性结合位点相同。采用IF和cel-p点击化学（click chemistry reaction）实验方法,研究cel-p在原代神经元细胞中随时间的定位。3.基于TMT标记,采用亲和标签的pull-down实验和液相色谱-串联质谱（Liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS/MS）的实验方法检测 cel-p在原代神经元细胞上结合的以及被竞争掉的靶蛋白。对cel-p结合的靶蛋白进行分析,分析celastrol作用于原代神经元细胞发挥神经保护性的可能靶点。4.根据分析结果,选取可信度较高的HMGB1蛋白进行验证。采用pull-down及SDS-PAGE凝胶电泳方法,研究celastrol是否可以与cel-p竞争性结合HMGB1蛋白。采用CETSA实验,研究celastrol是否可以增强HMGB1蛋白的热稳定性。5.采用WB和IF实验方法,研究建立原代神经元OGD模型后,celastrol对HMGB1、HSP70和NF-κB p65蛋白表达的影响。通过检测细胞培养上清中的HMGB1蛋白,研究模型组HMGB1蛋白随时间延长分泌的变化以及celastrol对HMGB1蛋白的分泌量的影响。6.采用重组人HMGB1、HMGB1 A box和B box蛋白,结合SDS-PAGE凝胶电泳方法和click chemistry reaction研究cel-p是否结合了 HMGB1蛋白的半胱氨酸位点。cel-p 是否减少了 B box 与 Toll 样受体 4（Toll like receptor4,TLR4）、晚期糖基化终末产物受体（receptor for advanced glycation end products,RAGE）的结合,从而使其失去致炎作用。cel-p是否通过结合HMGB1蛋白抑制了其升高小鼠巨噬细胞样细胞系RAW 264.7细胞TNF-α分泌的能力。动物水平1.采用线栓法建立雄性成年Sprague-Dawley大鼠大脑中动脉阻断（Middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型体内模拟脑I/R损伤,以依达拉奉注射剂（edaravone injection,eda,6 mg/kg）为阳性对照,确认 celastrol（1 mg/kg）是否具有体内神经保护性。在MCAO模型1.5 h后拔出线栓进行再灌注,再灌注后Sham组及Model组腹腔注射1 mL生理盐水,M+cel组腹腔注射celastrol（lmg/kg）,M+eda 组尾静脉注射 edaravone（6 mg/kg）,然后分别于 24 h、48 h各给药一次,共三次。24 h、48 h、72 h进行Zea-Longa法行为学评分,72 h后取出大鼠脑组织进行 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride（TTC）染色。2.在72 h后,每组取四只大鼠,经PBS、4%多聚甲醛灌流后取脑组织进行脱水、石蜡包埋,切片后对皮层组织神经元进行尼氏染色分析,对HMGB1、HSP70和NF-κB p65蛋白进行IF分析。每组取四只大鼠,分离患侧大脑中皮层组织对HMGB1、HSP70和NF-κB p65蛋白进行WB分析,进一步体内验证celastrol发挥神经保护性的靶点和机制。实验结果:细胞水平1.提取的原代神经元细胞纯度大于90%,可用于其他的实验研究。CCK-8方法确立OGD模型的最佳造模时间为缺糖缺氧4 h,celastrol与cel-p的IC50相近（celastrol IC50=2.06±0.52 μM,cel-p IC50=2.24±0.59 μM）,均具有明显的神经保护性。最佳给药剂量为0.1-0.8 μM,最佳给药时间为OGD模型后立即连续给药48 h。因此,合成的cel-p与母体化合物celastrol具有等效性,可代替原药用于后续靶点研究。2.采用SDS-PAGE凝胶电泳方法证实,对于原代神经元细胞,cel-p具有较高的生物结合效率,在低至0.8μM浓度下产生明显可见的条带,并与原药celastrol 8 ×（6.4 μM）竞争条件下具有相同的结合位点。采用IF方法和click chemistry reaction实验证实,cel-p可以在4 h内从细胞胞浆进入胞核,因此可用于标记胞浆和胞核的蛋白。3.采用TMT标记、pull-down和LC-MS/MS的方法检测cel-p在原代神经元细胞上结合的以及被竞争掉的靶蛋白。对cel-p结合的靶蛋白进行分析,发现共鉴定蛋白1405个,其中为高可信度的蛋白120个。4.根据分析结果,选取可信度较高的HMGB1蛋白进行验证。采用pull-down及SDS-PAGE凝胶电泳方法,证实celastrol可以与cel-p竞争性结合HMGB1蛋白,因此可进一步展开生物学实验以探究celastrol在细胞水平的作用靶点。采用CETSA实验,证实celastrol与HMGB1结合明显增强了 HMGB1的热稳定性。5.采用WB实验方法,证实建立原代神经元细胞OGD模型后,celastrol不能影响HMGB1的整体表达以及胞浆胞核的表达,明显升高了 HSP70的表达,降低了 NF-κB p65的表达。采用IF技术,证实cel-p与HMGB1蛋白具有共定位现象,对HMGB1、HSP70、NF-κB p65的影响趋势与WB结果一致。通过检测OGD模型组细胞培养上清中的HMGB1蛋白发现,模型组HMGB1蛋白随时间延长逐渐分泌出去到培养基中,在24 h以后达到高峰。而celastrol在OGD模型后给药48 h并没有减少培养基中HMGB1蛋白的分泌量。由以上结论我们推测,celastrol可能无法影响HMGB1蛋白的出入核和分泌,而是通过直接结合HMGB1蛋白使其失去致炎活性。6.采用重组人HMGB1蛋白,证实cel-p可以结合HMGB1蛋白,并且可以竞争性抑制已知的HMGB1蛋白抑制剂（甘草次酸、二甲双胍）与HMGB1的结合。N-Hex-5-ynyl-2-iodoacetamide（IAA-yne）与二硫键型 HMGB1 蛋白的结合可以被celastrol几乎全部抑制,用Dithiothreitol（DTT）还原HMGB1二硫键后,celastrol同样可以几乎全部抑制IAA-yne与HMGB1蛋白的结合。由此可知,celastrol可以结合二硫键型HMGB1蛋白的106位半胱氨酸,也可以结合全还原型HMGB1蛋白的23、45、106位半胱氨酸。采用重组人A box和B box蛋白,证实cel-p与Abox、B box的结合几乎不能被2-iodoacetamide（IAA）抑制,而IAA-yne与A box、B box的结合可以被celastrol几乎全部抑制。因此,celastrol除了结合HMGB1蛋白的半胱氨酸,还有其他的结合位点。Celastrol明显抑制了HMGB1引起的RAW 264.7细胞TNF-α分泌。此外,celastrol可明显抑制HMGB1 B box与TLR4、RAGE受体的结合,因此使其失去致炎活性。动物水平1.各组大鼠在MCAO后72 h进行TTC染色病理学分析显示,M+cel和M+eda组的大鼠脑组织损伤侧梗死体积相较于Model组显着降低（p<0.05）。神经功能缺损评分（Zea-Longa）显示,M+cel和M+eda的大鼠在MCAO 24 h、48 h和72 h时间点均显着降低神经功能缺损评分,改善运动功能和行为。因此,TTC染色、Zea-Longa法行为学评分结果表明,celastrol 1 mg/kg体内同样具有神经保护性。2.尼氏染色结果显示,相较于Model组大鼠,M+cel和M+eda组大鼠皮层神经元细胞尼氏小体数量显着增多,排列紧密。WB和IF实验结果表明,celastrol几乎不能影响HMGB1的表达水平,但是明显升高了 HSP70的表达,降低了 NF-κB p65,结果与体外实验趋势一致。因此,celastrol通过作用于HSP70和NF-κB p65在体内发挥抗炎作用和神经保护性。结论:由以上可知,celastrol对体内外脑缺血再灌注损伤均具有明显的神经保护性,一是通过直接结合HMGB1蛋白,使其不能与TLR4、RAGE受体结合,从而失去致炎作用,二是提高细胞或者组织HSP70的表达,降低NF-κB p65的表达而发挥抗炎作用。
丁黎莉[7]（2021）在《白介素-37通过髓源性抑制细胞影响急性胰腺炎炎症反应的机制研究》文中指出研究背景与目的:急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）是胰酶在体内异常激活所导致的局部或全身性炎症反应。促炎免疫与抗炎免疫系统失衡是促进疾病进展的重要机制。髓源性抑制细胞（myeloid-derived suppressor cell,MDSC）是骨髓来源的调节性免疫细胞,可通过精氨酸酶（Arginase）-1、活性氧（reactive oxygen species,ROS）、免疫抑制性受体（immune receptors,IRs）等机制发挥免疫抑制作用。含免疫球蛋白和ITIM基序的T细胞免疫受体（T cell immunoreceptor with Lg and ITIM domains,TIGIT）作为一种新型的IRs,对T细胞、B细胞、自然杀伤细胞（natural killer cell,NK）的功能产生一定影响。但是TIGIT在AP中T细胞上表达的变化及其作用目前尚无报道。白介素（interleukin,IL）-37是新发现的抗炎因子,可通过诱导调节性免疫细胞表型转化等方式发挥抗炎作用。我们在预实验中发现AP患者血浆中IL-37升高。本研究通过分析AP患者体内MDSC、IL-37的变化,结合体外实验进一步阐释IL-37通过影响MDSC的抑制功能,影响AP的发生发展的作用及其机制,为AP的治疗提供新的思路。研究方法:（1）应用流式细胞分析法（flow cytometry,FCM）测定患者及健康对照组（healthy control,HC）中HLADR-CD11b+MDSC及其亚群CD66b+CD14-粒细胞样及CD66b-CD14+单核细胞样MDSC比例与数目,并分析与APACHE II评分、C-反应蛋白、住院天数（length of stay,LOS）的相关性。应用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（CFSE）染色测定T细胞增殖法分析HC来源与重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）来源的MDSC的抑制功能。应用FCM进一步分析及来源的Arg-1、活性氧（Reactive oxygen species,ROS）及MDSC表面CD155的平均荧光强度（mean fluorescence intensity,MFI）表达有无差异。（2）应用FCM测定HC及AP患者外周血中CD3+T细胞及其亚群CD4+、CD8+T细胞比例、数量。测定HC与来AP来源的CD3+T细胞及其亚群CD4+、CD8+T细胞中的IFN-γ的比例及细胞表面TIGIT的差异。分析CD3+T细胞及其亚群细胞表面TIGIT表达与IFN-γ的表达、细胞增殖能力之间的关系。（3）应用酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）测定HC、AP患者血浆IL-37浓度,并检测其与APACHE II评分、MDSC之间的相关性。体外分析IL-37处理组与未处理组的MDSC的比例、Arg-1、ROS及MDSC表面CD155的表达变化。将IL-37处理的与未处理的MDSC细胞分别与T细胞共培养,检测各孔细胞增殖率。将HC及SAP来源的MDSC与TIGIT+及TIGIT-细胞分别共培养,检测各组细胞的增殖率变化,揭示抑制细胞可能机制。研究结果:（1）AP患者外周血中MDSC细胞及其亚群G-MDSC、M-MDSC在外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC）中比例及绝对计数增加,且与APACHE II评分、C-反应蛋白正相关。SAP患者来源的MDSC对CD3+T细胞抑制作用增强。SAP来源的MDSC较HC组的Arg-1、ROS、CD155表达升高。（2）AP患者外周血中CD3+T细胞及其CD4+、CD8+亚群在PBMC中比例及数量减少,且各T细胞亚群IFN-γ分泌减少。AP患者外周血T细胞表面TIGIT表达比例较HC组降低。TIGIT+T细胞较TIGIT-T细胞IFN-γ分泌增多,细胞增殖能力增强。（3）AP患者血浆中IL-37浓度较HC升高,与MDSC呈负性相关。IL-37在体外不能诱导PBMC中细胞向MDSC转化,但是可以增强MDSC对T细胞的抑制作用。IL-37在体外降低MDSC的ROS、CD155的表达,对Arg-1表达强度无影响。阻断ROS降低MDSC表面CD155的表达。MDSC对TIGIT+T细胞具有抑制功能,而对TIGIT-T细胞无抑制功能。研究结论:本研究发现MDSC在AP患者体内增多,且MDSC抑制功能增强,且与疾病严重程度正相关,MDSC对T细胞的抑制作用可能是通过CD155/TIGIT途径实现的。AP患者外周血中IL-37因子升高,IL-37增强MDSC对T细胞的抑制作用,其增强作用机制尚不明确。本研究为探究AP的发病机制提供了新的思路,为阻止AP进展为SAP提供了新的理论依据。
黄丹[8]（2021）在《雷帕霉素通过lncRNA-LOC102553434介导细胞焦亡途径调控肢体缺血再灌注肺损伤的功能及机制研究》文中进行了进一步梳理研究背景:缺血再灌注损伤（IR）是指缺血状态的组织重新恢复血流引起的机体生理、生化和病理性改变,能够影响局部缺血组织的功能、诱发炎症反应和损伤远隔器官。肺是IR过程中最脆弱的远隔器官之一。肢体缺血再灌注损伤（LIR）诱导的急性肺损伤（ALI）是21世纪临床医生面临的常见问题。ALI是临床上十分常见的一类危重症,是由严重创伤、休克、酸中毒或严重感染等多种肺内外因素引起的,病死率高达4031%,以炎症和血管通透性增加为特征,临床上表现为进行性低氧血症和呼吸窘迫,发展至严重阶段被称为急性呼吸窘迫综合征。肺表面活性物质的不足和肺结构发育不成熟增加了肺对IR损伤的敏感性,而炎症和氧化应激有助于LIR诱导的ALI的病理过程。尽管ALI已被广泛探索几十年,但相关研究没有取得较大进展,ALI患者仍然需要面临长期的身体损伤。随着对ALI的认识在不断深入,大部分学者认为炎症风暴是ALI发生的关键因素。雷帕霉素（RAPA）是属于大环内酯类化合物的免疫抑制剂,通过抑制白细胞介素（IL）-2的表达从而阻碍T细胞及B细胞激活实现免疫抑制,被美国食品与药品管理局批准作为免疫抑制剂用于肾移植抗排异治疗和淋巴管肌瘤。大量研究证明RAPA不仅能抑制癌症进展,且在糖尿病、神经退行性疾病以及血液类疾病中疗效显着。总之,RAPA能缓解炎症,具有ALI治疗潜力。LncRNA是一类长度超过200个核苷酸的RNA转录本,参与多种生理和病理过程。研究发现,lncRNA可能通过直接或间接调控焦亡相关蛋白进而调控各种疾病发生发展。LncRNA在LIR诱导的组织损伤中的研究已有报道,然而,lncRNA在LIR肺损伤中的调控机制还尚未清楚。第一部分RAPA通过抑制细胞焦亡保护LIR诱导的ALI研究目的:探究RAPA对LIR诱导的ALI动物模型的疗效和机制。研究方法:本实验以假手术组（sham组）为对照,构建LIR诱导的ALI大鼠模型（IR组）,实验组使用RAPA进行预处理（IR+RAPA组）。使用HE染色确定大鼠肺组织的病理学变化;试剂盒检测大鼠的SOD活性和MDA含量以评估抗氧化能力;免疫组化和western blot检测焦亡标志因子NLRP3、caspase-1蛋白表达水平;ELISA检测炎症因子大鼠血清中IL-1β、IL-18的水平变化。研究结果:1.与IR组相比,IR+RAPA组肺水肿、充血明显减轻,炎性细胞浸润减少,具有异型性的肺组织明显保留。2.与IR组相比,IR+RAPA组显着逆转了由于IR处理导致的大鼠SOD活性、MDA水平、NLRP3和caspase-1蛋白水平以及1L-1β和1L-18含量的改变。第二部分大鼠LIR肺组织转录组测序分析研究目的:通过高通量测序筛选通过焦亡或损伤相关通路参与RAPA改善ALI进程的差异表达lncRNA和mRNA。研究方法:本实验模型组采用LIR诱导大鼠的ALI（IR组）,实验组使用RAPA对LIR大鼠预处理（IR+RAPA组）,最后通过高通量测序表征两组大鼠的肺组织表达谱,以获得IR组和IR+RAPA组肺组织中mRNA和lncRNA的差异表达特征。GO功能富集分析和KEGG通路富集分析探究了差异表达的mRNA和lncRNA的富集情况;Miranda和RNAhybird软件对差异表达的mRNA和lncRNA与miRNA的关系进行预测,构建ce RNA调控关系。研究结果:1.IR组和IR+RAPA组间总计鉴定到220个差异表达mRNA,与IR组相比,IR+RAPA组有149个下调表达的mRNA和71个上调表达的mRNA。此外,鉴定到63个差异表达的lncRNA,与IR组相比,IR+RAPA组有27个下调表达的lncRNA和36个上调表达的lncRNA。2.IR组和IR+RAPA组间的差异表达mRNA及lncRNA主要参与IL-1的细胞反应、IL-6生物合成过程的正调控、中性粒细胞趋化性、细胞因子-细胞因子受体的相互作用以及细胞粘附分子等生物学过程和信号通路。3.IR组和IR+RAPA组间的差异表达基因共得到1945条lncRNA-miRNAmRNA调控网络,表明存在差异表达lncRNA通过海绵吸附miRNA影响mRNA的表达对ALI的发生和治疗产生影响。4.lncRNA LOC102553434和MMP9在IR组的表达量显着高于Sham组和IR+RAPA组,且MMP9是LOC102553434/rno-miR-674-5p/MMP9轴的下游靶基因,因此,RAPA处理降低LOC102553434在ALI肺组织中的表达进而可能通过靶向rno-miR-674-5p/MMP9轴改善肺损伤。第三部分LOC102553434在肺泡上皮细胞损伤中功能研究研究目的:探究RAPA通过LOC102553434介导的ce RNA机制抑制细胞焦亡改善肺损伤中的作用机制。研究方法:本研究选取大鼠肺泡上皮细胞系进行体外实验,通过q RT-PCR检测Blank组、LPS组和LPS+RAPA组中炎症因子（1L-1β、1L-18）以及LOC102553434、rno-miR-674-5p和MMP9的表达变化;利用si RNA干扰LOC102553434的表达,随后使用CCK-8鉴定细胞增殖能力;WB检测Blank组、LPS组、LPS+RAPA+si-NC组和LPS+RAPA+si RNA组中NRPL3、caspase-1以及MMP9的表达。研究结果:1.与LPS组相比,Blank和LPS+RAPA组肺泡上皮细胞的1L-1β、1L-18、LOC102553434和MMP9表达显着下降,而rno-miR-674-5p的表达显着升高。2.干扰LOC102553434后,LPS+si RNA组的肺泡上皮细胞的增殖能力明显较LPS组和LPS+si RNA-NC组增强。3.与LPS组或LPS+RAPA+si-NC组相比,LPS+RAPA+si RNA组的肺泡上皮细胞中NRPL3、caspase-1以及MMP9蛋白表达显着降低。结论:1.RAPA通过抑制细胞焦亡保护LIR诱导的ALI。2.差异表达lncRNA通过海绵吸附miRNA调节mRNA的表达,参与LIR导致的大鼠ALI的病理过程,而RAPA通过调控lncRNA的表达从而达到治疗ALI的目的。3.LOC102553434可能通过作用于rno-miR-674-5p/MMP9轴参与肺泡上皮细胞损伤发生,有望成为ALI潜在的预防和治疗靶点。4.RAPA通过下调LOC102553434的表达进而下调MMP9的表达以及抑制焦亡相关分子的表达的双重抑制作用来减轻ALI,可能是ALI治疗的有效候选药物。
于春微[9]（2021）在《酿酒酵母β-葡聚糖对RAW264.7细胞氧化应激、炎症和凋亡的缓解作用及机制》文中研究指明巨噬细胞是先天免疫系统的高度可塑性细胞,参与多种病理进程,对许多毒性刺激诱导的氧化应激、炎症和凋亡具有高度的抗性。酿酒酵母β-葡聚糖已被证明是一种有效的免疫增强剂,课题组前期研究证实其可降低肉羊机体氧化应激。本研究首先利用LPS诱导RAW264.7细胞建立氧化应激和炎症反应模型,初步证实酿酒酵母β-葡聚糖的抗氧化作用。然后,在氧化应激模型基础上,探究酿酒酵母β-葡聚糖对RAW264.7细胞抗氧化、抗炎及抗凋亡的分子作用机制,为预防和治疗氧化应激相关性疾病提供新的思路。本研究主要从细胞信号通路转导方面对酿酒酵母β-葡聚糖抗氧化、抗炎和抗凋亡作用机制进行研究,结果如下:（1）试验一以LPS为诱导物,氧化应激和促炎细胞因子作为建立氧化应激和炎症模型指标,探究LPS对RAW264.7细胞氧化损伤效果。结果表明:0.1～5μg/m L LPS处理RAW264.7细胞12 h后,细胞内氧化应激指标MDA和ROS产生显着增多,抗氧化指标SOD、CAT和GSH-Px酶活性显着降低;细胞培养上清液中促炎细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α释放显着增多,细胞内COX-2和i NOS含量显着升高。综合多项指标,以1μg/m L LPS作为建立细胞氧化应激和炎症模型的最佳浓度。（2）试验二在试验一基础上,初步探讨酿酒酵母β-葡聚糖对LPS诱导的RAW264.7细胞氧化应激和炎症损伤的缓解作用。结果表明:酿酒酵母β-葡聚糖增强抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px和HO活性,抑制LPS诱导的MDA和ROS产生而发挥抗氧化作用,降低IL-1β、IL-6和TNF-α的释放以及COX-2和i NOS水平而起到抗炎效果,推测可能是酿酒酵母β-葡聚糖激活抗氧化转录因子从而发挥预保护作用。这些结果充分说明β-葡聚糖具有抗氧化和抗炎的双重调节作用,从而抑制细胞内ROS产生,进而对RAW264.7细胞起到保护作用。但其调控抗氧化和抗炎信号转导机制仍需在氧化应激模型中进一步验证。（3）试验三以试验二为基础进行深入性研究,本试验旨在探讨β-葡聚糖抑制LPS诱导的RAW264.7细胞氧化应激分子机制。为阐明β-葡聚糖抗氧化的分子机制,我们设计了β-葡聚糖添加试验,结果表明:β-葡聚糖能够激活其受体Dectin-1介导的Nrf2/HO-1信号转导通路。氧化应激模型中,在LPS抑制Nrf2和HO-1表达的条件下,β-葡聚糖能显着上调LPS诱导的Dectin-1、Nrf2和HO-1的表达,抑制ROS产生,但β-葡聚糖这些作用可被Dectin-1抑制剂Laminarin、Nrf2抑制剂ML385和HO-1抑制剂Sn PP逆转。该结果表明β-葡聚糖可以通过Dectin-1/Nrf2/HO-1信号通路抑制LPS诱导的RAW264.7细胞氧化应激。（4）试验四在试验三基础上,旨在探讨β-葡聚糖抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应的分子机制。结果表明:炎症模型中,LPS显着激活炎症反应转录因子NF-κBp65表达,促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、COX-2和i NOS基因和蛋白表达显着增强;β-葡聚糖能显着抑制LPS诱导的NF-κBp65及下游促炎细胞因子的表达,而这种抗炎效应能够被Sn PP逆转。该结果表明β-葡聚糖可以通过Nrf2/HO-1信号通路抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应。（5）试验五基于试验四结果,旨在探讨β-葡聚糖抑制LPS诱导RAW264.7细胞NLRP3形成的分子机制。结果表明:LPS显着激活NLRP3炎性小体,增强ASC、IL-18和Caspase-1表达;添加β-葡聚糖作用后,能显着抑制NLRP3、ASC、Caspase-1和IL-18表达,但这种抑制状态能够被Sn PP逆转。该结果表明β-葡聚糖可以通过Nrf2/HO-1信号通路抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NLRP3形成。（6）试验六基于以上试验结果及氧化应激造成细胞凋亡的理论基础,旨在探讨β-葡聚糖抑制LPS诱导的RAW264.7细胞凋亡的分子机制。结果表明:LPS显着增强细胞凋亡率,β-葡聚糖则显着降低细胞凋亡率;LPS显着增强Bax表达,抑制Bcl-2表达,添加β-葡聚糖作用后,Bax表达显着下降,Bcl-2表达显着上升,而这种效应能够被Sn PP逆转。该结果表明β-葡聚糖可以通过Nrf2/HO-1信号通路抑制LPS诱导的RAW264.7细胞凋亡。综上所述,本研究阐明β-葡聚糖可激活Dectin-1介导的Nrf2/HO-1信号通路抑制RAW264.7细胞内ROS产生、NF-κBp65和NLRP3表达和凋亡,从而对细胞发挥保护作用。因此,以激活Nrf2/HO-1信号通路为靶标有望成为防治氧化应激相关疾病的一个新途径。
左旭[10]（2021）在《人参挥发油的抗炎活性研究》文中研究表明炎症引发的疾病对人类健康构成了巨大的威胁。目前临床中治疗炎症反应的药物主要是西药,但西药有不同程度的毒副作用和药物残留。人参挥发油是一种从人参中提取的纯天然的,含有多种化合物的混合物。在先前的研究中已证明人参挥发油有抑菌、抑制癌细胞生长、改善心肌缺血的作用,但其抗炎活性未见报道。本实验采用脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导RAW264.7巨噬细胞创建体外炎症模型,探究了人参挥发油对LPS刺激RAW264.7细胞后,其炎症因子的转录和蛋白水平,以及Toll样受体4（Toll-like receptor4,TLR4）、髓样分化因子88（Myeloid differential 88,MyD88）蛋白和κ基因结合核因子（Nuclear factor-κ-gene binding,NF-κB）信号通路相关蛋白的表达水平,来探究人参挥发油的体外抗炎活性。构建二甲苯致小鼠耳肿胀的炎症模型,评估人参挥发油的体内抗炎活性。为人参挥发油的抗炎活性研究提供理论基础和参考价值。研究内容如下:（1）人参挥发油的提取及其成分分析本研究采用超临界CO2萃取法,得到人参挥发油。凭借气相色谱-质谱联用仪（Gas Chromatography-Mass Spectrometer,GC-MS）检测其成分。一共检测出40种化合物,主要占比为:人参环氧炔醇（41.12%）和人参炔醇（26.90%）。（2）人参挥发油对LPS诱导RAW264.7细胞分泌炎性因子表达的影响通过CCK-8法检测人参挥发油的细胞毒性,利用酶联免疫吸附测定（Enzyme-linked Immuno Sorbent Assay,ELISA）、实时荧光定量聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）法检测LPS诱导的RAW264.7细胞炎性因子转运核糖核酸（Messenger Ribonucleic Acid,mRNA）的表达水平和蛋白分泌水平。结果表明:人参挥发油在浓度≤1μg/ml时为安全浓度,即后续试验选择的药物浓度为:1μg/m L、0.8μg/m L、0.6μg/m L。人参挥发油在1μg/m L时可以极显着抑制肿瘤坏死因子α（Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α）、白细胞介素-6（Interleukin-6,IL-6）和白细胞介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）蛋白分泌量及mRNA的表达水平,表明人参挥发油可以通过抑制巨噬细胞的TNF-α、IL-6和IL-1β蛋白质分泌量及mRNA的表达水平,发挥抗炎作用。（3）人参挥发油对LPS诱导RAW264.7细胞中TLR4蛋白、MyD88蛋白和NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响通过蛋白印迹实验（Western blot）实验表明人参挥发油可以抑制LPS诱导RAW264.7细胞中MyD88、TLR4蛋白的表达;可能是通过降低RAW264.7细胞中P65的磷酸化水平,抑制NF-κB信号通路来发挥抗炎作用。（4）人参挥发油对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响通过称量不同实验组小鼠的耳片重量,分别计算其肿胀率和抑制率,结果表明人参挥发油对二甲苯引起的小鼠耳部肿胀有明显的抑制作用。结论:1、以超临界CO2萃取法提取人挥发油,检测出其化学成分占比:人参环氧炔醇（41.12%）,人参炔醇（26.90%）。2、细胞实验结果提示,人参挥发油可以抑制炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌,并抑制NF-κB通路,从而起到抗炎作用。3、人参挥发油可预防二甲苯致小鼠的耳部炎症。
二、Enhanced anti-inflammatory effects by steroids in a porcine sepsis model（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Enhanced anti-inflammatory effects by steroids in a porcine sepsis model（论文提纲范文）
（3）细胞色素P450 1A1对巨噬细胞中一氧化氮生成的影响（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 细胞色素P4501A1在感染和炎症中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（6）基于定量化学蛋白质组学研究雷公藤红素抗缺血性脑卒中的靶点（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略语名词对照 |
| 文献综述 雷公藤红素对神经退行性疾病的神经保护作用及主要作用机制 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 实验一 celastrol发挥体外神经保护作用的靶点和通路 |
| 第一节 celastrol及cel-p的体外神经保护性初步探索 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验材料 |
| 1.1.4 实验设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 新生大鼠原代皮层神经元细胞提取 |
| 1.2.2 定期显微镜下观察神经元形态 |
| 1.2.3 IF鉴定大鼠原代皮层神经元特异性及纯度 |
| 1.2.4 神经元OGD模型条件摸索 |
| 1.2.5 CCK-8法确定celastrol及cel-p的IC_(50) |
| 1.2.6 celastrol及cel-p是否具有体外神经保护作用 |
| 1.2.7 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二节 cel-p具有较高的蛋白标记效率 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验材料 |
| 1.1.4 实验设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 提取大鼠原代皮层神经元细胞进行体外培养 |
| 1.2.2 cel-p蛋白标记效率探究 |
| 1.2.3 click chemistry reaction及SDS-PAGE凝胶分离 |
| 1.2.4 cel-p细胞成像实验 |
| 1.2.5 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三节 TMT标记结合LC-MS/MS确认celastrol的靶蛋白 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验材料 |
| 1.1.4 实验设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 提取大鼠原代皮层神经元细胞进行体外培养 |
| 1.2.2 pull-down, TMT标记及LC-MS/MS分析 |
| 1.2.3 cel-p的靶标识别及验证 |
| 1.2.4 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四节 HMGB1是celastrol的直接结合靶蛋白 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验材料 |
| 1.1.4 实验设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 提取大鼠原代皮层神经元细胞进行体外培养 |
| 1.2.2 pull-down及WB实验对HMGB1进行验证 |
| 1.2.3 celastrol对HMGB1蛋白热稳定性的影响 |
| 1.2.4 click chemistry reaction荧光实验 |
| 1.2.5 高浓度celastrol和cel-p作用5h对HMGB1蛋白的影响 |
| 1.2.6 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第五节 celastrol发挥神经保护性作用的通路 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验材料 |
| 1.1.4 实验设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 提取大鼠原代皮层神经元细胞进行体外培养 |
| 1.2.2 celastrol对正常神经元细胞HMGB1蛋白表达的影响 |
| 1.2.3 celastrol对OGD模型后HMGB1蛋白表达的影响 |
| 1.2.4 celastrol对神经元OGD模型HMGB1/HSP70/NF-κB p65的影响 |
| 1.2.5 IF实验观察celastrol对HMGB1、HSP70、NF-κB p65的影响 |
| 1.2.6 celastrol是否影响上清中HMGB1蛋白表达 |
| 1.2.7 celastrol是否影响HMGB1蛋白的氧化还原性 |
| 1.2.8 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第六节 celastrol直接结合HMGB1和B box使其失活 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验材料 |
| 1.1.4 实验设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 提取大鼠原代皮层神经元细胞进行体外培养 |
| 1.2.2 重组人A box及B box蛋白纯化及表达 |
| 1.2.3 重组人HMGB1蛋白与celastrol及cel-p反应 |
| 1.2.4 HMGB1抑制剂与cel-p的竞争性结合 |
| 1.2.5 重组人A box及B box蛋白与celastrol及cel-p反应 |
| 1.2.6 RAW 264.7细胞复苏、培养、传代、冻存 |
| 1.2.7 celastrol对HMGB1、B box引起的TNF-α分泌升高的影响 |
| 1.2.8 celastrol对B box与受体结合的影响 |
| 1.2.9 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 实验二 celastrol对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究 |
| 第一节 celastrol的体内药效初步评价 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验材料 |
| 1.1.4 实验设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 实验动物MCAO模型制备 |
| 1.2.2 实验动物分组及给药 |
| 1.2.3 Zea-Longa法评估动物的神经行为缺损 |
| 1.2.4 TTC染色观察大鼠的脑梗死情况 |
| 1.2.5 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二节 celastrol通过HMGB1,HSP70,NF-κB p65发挥体内神经保护性 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验材料 |
| 1.1.4 实验设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 实验动物MCAO模型制备 |
| 1.2.2 实验动物分组及给药 |
| 1.2.3 大鼠灌流,取脑及脱水 |
| 1.2.4 尼氏染色观察celastrol对尼氏小体的影响 |
| 1.2.5 IF实验观察celastrol对HMGB1、HSP70、NF-κB p65的影响 |
| 1.2.6 WB检测大鼠中皮层HMGB1、HSP70、NF-κB p65表达 |
| 1.2.7 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 讨论 |
| 全文总结 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间的成果 |
| 致谢 |
| 中医药科技查新报告书 |
（7）白介素-37通过髓源性抑制细胞影响急性胰腺炎炎症反应的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 急性胰腺炎 |
| 1.1.1 急性胰腺炎概述 |
| 1.1.2 AP的发病机制 |
| 1.2 调节性免疫细胞 |
| 1.2.1 调节性T细胞 |
| 1.2.2 调节性B细胞 |
| 1.2.3 调节性NK细胞 |
| 1.2.4 调节性DC细胞 |
| 1.2.5 调节性巨噬细胞 |
| 1.3 髓源性抑制细胞 |
| 1.3.1 髓源性抑制细胞概述 |
| 1.3.2 MDSC的产生与分化 |
| 1.3.3 MDSC的功能 |
| 1.3.4 影响MDSC功能的因素 |
| 1.3.5 MDSC与疾病 |
| 1.4 TIGIT |
| 1.4.1 耗竭性T细胞概述 |
| 1.4.2 TIGIT概况 |
| 1.4.3 TIGIT在肿瘤中的研究 |
| 1.4.4 TIGIT在移植中的研究 |
| 1.4.5 TIGIT在感染性疾病中的研究 |
| 1.4.6 TIGIT在自身免疫性疾病中的研究 |
| 1.5 IL-37 |
| 1.5.1 IL-37 的调控作用 |
| 1.5.2 IL-37 在疾病中的作用 |
| 1.6 MDSC与 TIGIT的关系及其调控机制 |
| 1.7 展望 |
| 第2章 AP患者中MDSC数量及功能分析 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 试剂耗材 |
| 2.2.2 仪器设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 实验对象 |
| 2.3.2 样本采集与保存 |
| 2.3.3 梯度密度离心法分离PBMC |
| 2.3.4 细胞计数 |
| 2.3.5 细胞表面染色 |
| 2.3.6 体外刺激PBMC实验 |
| 2.3.7 细胞内染色 |
| 2.3.8 流式分选MDSC细胞 |
| 2.3.9 磁珠分选CD3~+T 细胞 |
| 2.3.10 MDSC抑制实验 |
| 2.3.11 抑制实验检测 |
| 2.3.12 ROS染色 |
| 2.3.13 统计学方法 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 HC、MAP、SAP患者一般信息及临床特点 |
| 2.4.2 MAP、SAP患者外周血中MDSC细胞升高 |
| 2.4.3 SAP患者腹腔积液中MDSC细胞比例较外周血升高 |
| 2.4.4 AP患者外周血中MDSC升高与疾病严重程度相关 |
| 2.4.5 G-MDSC和 M-MDSC与疾病严重程度相关性分析 |
| 2.4.6 SAP患者外周血中MDSC对 T细胞的抑制作用更强 |
| 2.4.7 AP患者与健康对照外周血中 MDSC中 Arg-1、ROS分析 |
| 2.4.8 AP患者与健康对照外周血中MDSC表面CD155 表达分析 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 第3章 TIGIT在 AP患者外周血中表达及其功能分析 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 试剂耗材 |
| 3.2.2 仪器设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 研究对象、入选标准、排除标准及疾病严重程度分级标准 |
| 3.3.2 样本采集与保存 |
| 3.3.3 外周血PBMC的获取 |
| 3.3.4 细胞计数 |
| 3.3.5 细胞表面染色 |
| 3.3.6 PBMC体外刺激实验 |
| 3.3.7 细胞内染色 |
| 3.3.8 流式分选CD3~+TIGIT~+、CD3~+TIGIT~-细胞 |
| 3.3.9 细胞增殖实验 |
| 3.3.10 细胞增殖实验检测 |
| 3.3.11 数据分析及统计方法 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 AP外周血中CD3~+ T 细胞及CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+ T细胞百分比及数量减少 |
| 3.4.2 AP外周血中CD3~+ T 细胞及CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+ T细胞表面TIGIT表达下降 |
| 3.4.3 SAP患者外周血中CD3~+ T 细胞及其亚群CD4~+、CD8~+ T细胞功能检测 |
| 3.4.4 TIGIT~+T 细胞增殖能力较TIGIT~-T 细胞增殖能力强 |
| 3.5 实验讨论 |
| 3.6 小结 |
| 第4章 IL-37 通过影响 CD155 表达影响 MDSC对 T细胞的抑制功能 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 研究对象、入选标准、排除标准及疾病严重程度分级标准 |
| 4.3.2 样本采集与保存 |
| 4.3.3 外周血PBMC的获取 |
| 4.3.4 细胞计数 |
| 4.3.5 细胞表面染色 |
| 4.3.6 PBMC体外刺激实验 |
| 4.3.7 细胞内染色 |
| 4.3.8 流式分选MDSC细胞及CD3~+TIGIT~+、CD3~+TIGIT~-细胞 |
| 4.3.9 细胞增殖实验 |
| 4.3.10 细胞增殖实验检测 |
| 4.3.11 ELISA法检测血浆IL-37 浓度 |
| 4.3.12 数据分析及统计方法 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 AP患者血清中及单核细胞中IL-37 表达升高 |
| 4.4.2 IL-37对MDSC表型的影响 |
| 4.4.3 IL-37对MDSC抑制功能的影响 |
| 4.4.4 IL-37对MDSC抑制功能的影响的机制 |
| 4.4.5 MDSC表面CD155 的表达依赖于ROS的表达 |
| 4.4.6 MDSC通过CD155/TIGIT途径抑制T细胞功能 |
| 4.5 实验讨论 |
| 4.6 小结 |
| 第5章 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及博士在读期间科研成果 |
| 致谢 |
（8）雷帕霉素通过lncRNA-LOC102553434介导细胞焦亡途径调控肢体缺血再灌注肺损伤的功能及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 引言 |
| 1、肢体缺血再灌注急性肺损伤概述 |
| 2、炎症小体的作用机制 |
| 3、细胞焦亡参与ALI发病过程 |
| 4、LncRNA对细胞焦亡和ALI的影响 |
| 5、雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)对疾病的影响 |
| 6、本课题研究目的及内容 |
| 第一部分 RAPA通过抑制细胞焦亡保护LIR诱导的ALI |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验步骤 |
| 3 结果 |
| 3.1 RAPA缓解LIR诱导的ALI |
| 3.2 RAPA在 ALI大鼠中发挥抗氧化作用 |
| 3.3 RAPA通过抑制细胞焦亡保护LIR诱导的ALI |
| 3.4 RAPA减轻LIR诱导的炎症 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 大鼠LIR肺组织转录组测序分析 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验步骤 |
| 3 结果 |
| 3.1 数据质量评估与比对 |
| 3.2 Clean reads的基因结构分析和染色体位置分布 |
| 3.3 差异表达的lncRNA和 mRNA |
| 3.4 差异表达mRNA和 lncRNA功能富集分析 |
| 3.5 lncRNA-miRNA-mRNA的 ceRNA分析结果 |
| 3.6 候选lnRNA的 qRT-PCR验证 |
| 3.7 lncRNA-miRNA-mRNA共表达网络 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 LOC102553434 在肺泡上皮细胞损伤中功能研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 RAPA保护肺泡上皮细胞免受LPS损伤 |
| 3.2 RAPA调控LOC102553434、rno-miR-674-5p和 MMP9 的表达 |
| 3.3 干扰LOC102553434 恢复LPS损伤的肺泡上皮细胞的增殖能力 |
| 3.4 LOC102553434 干扰抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞焦亡和MMP9 的表达 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 肢体缺血再灌注急性肺损伤概述 |
| 参考文献 |
（9）酿酒酵母β-葡聚糖对RAW264.7细胞氧化应激、炎症和凋亡的缓解作用及机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 酿酒酵母β-葡聚糖 |
| 1.1.1 β-葡聚糖简介 |
| 1.1.2 Dectin-1 |
| 1.2 Nrf2/HO-1 信号通路抗氧化、抗炎和抗凋亡作用 |
| 1.2.1 氧化应激 |
| 1.2.2 Nrf2/HO-1 信号通路 |
| 1.2.3 Nrf2/HO-1 信号通路作用及其分子机制 |
| 1.3 氧化应激激活NLRP3 |
| 1.4 氧化应激激活NF-κB |
| 1.4.1 NF-κB抗氧化靶标 |
| 1.4.2 ROS诱导NF-κB靶标 |
| 1.5 巨噬细胞与氧化应激 |
| 1.6 研究目的和意义 |
| 1.7 研究内容 |
| 1.7.1 LPS诱导RAW264.7 细胞氧化应激与炎症模型建立 |
| 1.7.2 β-葡聚糖抑制LPS诱导的RAW264.7 细胞氧化应激及炎症反应 |
| 1.7.3 β-葡聚糖通过Dectin-1/Nrf/HO-1 通路调节LPS诱导的RAW264.7 细胞氧化应激 |
| 1.7.4 β-葡聚糖通过Nrf/HO-1 通路调节LPS诱导的RAW264.7 细胞炎症应答 |
| 1.7.5 β-葡聚糖通过Nrf2/HO-1 通路调节LPS诱导的RAW264.7 细胞炎症小体NLRP3 形成 |
| 1.7.6 β-葡聚糖通过Nrf/HO-1 调节LPS诱导RAW264.7 细胞凋亡 |
| 2 试验内容 |
| 2.1 试验一LPS诱导的RAW264.7 细胞氧化应激与炎症模型建立 |
| 2.1.1 引言 |
| 2.1.2 试验材料与方法 |
| 2.1.3 结果 |
| 2.1.4 讨论 |
| 2.1.5 小结 |
| 2.2 试验二β-葡聚糖对LPS诱导的RAW264.7 细胞氧化应激和炎症的保护作用 |
| 2.2.1 引言 |
| 2.2.2 试验材料与方法 |
| 2.2.3 结果 |
| 2.2.4 讨论 |
| 2.2.5 小结 |
| 2.3 试验三β-葡聚糖通过Dectin-1/Nrf/HO-1 通路调节LPS诱导的RAW264.7细胞氧化应激 |
| 2.3.1 引言 |
| 2.3.2 试验材料与方法 |
| 2.3.3 结果 |
| 2.3.4 讨论 |
| 2.3.5 小结 |
| 2.4 试验四β-葡聚糖通过Nrf2/HO-1 通路抑制LPS诱导的RAW264.7 细胞炎症反应 |
| 2.4.1 引言 |
| 2.4.2 试验材料与方法 |
| 2.4.3 结果 |
| 2.4.4 讨论 |
| 2.4.5 小结 |
| 2.5 试验五β-葡聚糖通过Nrf/HO-1 抑制LPS诱导RAW264.7 细胞炎症小体NLRP3 形成 |
| 2.5.1 引言 |
| 2.5.2 试验材料与方法 |
| 2.5.3 结果 |
| 2.5.4 讨论 |
| 2.5.5 小结 |
| 2.6 试验六β-葡聚糖通过Nrf2/HO-1 抑制LPS诱导的RAW264.7 细胞凋亡 |
| 2.6.1 引言 |
| 2.6.2 试验材料与方法 |
| 2.6.3 结果 |
| 2.6.4 讨论 |
| 2.6.5 小结 |
| 3 结论 |
| 4 创新性 |
| 5 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（10）人参挥发油的抗炎活性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 炎症概述 |
| 1.1.1 促炎性细胞因子 |
| 1.1.2 NF-κB信号通路 |
| 1.1.3 炎症模型 |
| 1.2 人参挥发油的研究进展 |
| 1.2.1 人参挥发油的提取 |
| 1.2.2 人参挥发油的生物活性研究 |
| 第2章 人参挥发油的提取及其成分分析 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 材料与试剂 |
| 2.1.2 仪器与设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 人参预处理 |
| 2.2.2 超临界提取工艺 |
| 2.2.3 GC-MS检测 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 人参挥发油对LPS诱导RAW264.7细胞分泌炎性因子的影响 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验细胞 |
| 3.1.2 实验试剂 |
| 3.1.3 实验仪器 |
| 3.1.4 实验试剂配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 RAW264.7细胞培养 |
| 3.2.2 CCK-8法测定人参挥发油的细胞毒性 |
| 3.2.3 LPS造模的确定 |
| 3.2.4 实时荧光定量PCR(Real-time PCR) |
| 3.2.5 酶联免疫吸附试验(ELISA) |
| 3.2.6 数据处理及统计学分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 人参挥发油对RAW264.7细胞毒性作用 |
| 3.3.2 LPS最佳造模剂量的确定 |
| 3.3.3 人参挥发油对RAW264.7细胞TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA表达的影响 |
| 3.3.4 人参挥发油对RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-6和IL-1β蛋白含量的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第4章 人参挥发油在炎症反应中的抗炎机制研究 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验试剂 |
| 4.1.2 实验仪器 |
| 4.1.3 实验试剂配制 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 实验分组及炎症模型的制备 |
| 4.2.2 蛋白印迹实验(Western blot) |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第5章 人参挥发油对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 实验动物 |
| 5.1.2 实验试剂 |
| 5.1.3 实验仪器 |
| 5.1.4 试剂配制 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 小鼠耳部肿胀模型建立及评价 |
| 5.2.2 统计方法 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第6章 讨论 |
| 第7章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在校期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
四、Enhanced anti-inflammatory effects by steroids in a porcine sepsis model（论文参考文献）
- [1]系统性红斑狼疮糖皮质激素抵抗的机制研究进展[J]. 厉瑶,陈红波. 中华风湿病学杂志, 2021(12)
- [2]杨梅素对脓毒症相关急性肺损伤保护作用与机制的研究[D]. 徐海博. 河北医科大学, 2021
- [3]细胞色素P450 1A1对巨噬细胞中一氧化氮生成的影响[D]. 唐欣. 遵义医科大学, 2021(01)
- [4]三七皂苷R1对脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用研究[D]. 曹波. 西南医科大学, 2021
- [5]5-HT3受体拮抗剂与肝衰竭患者预后的相关性研究[D]. 陈宇婷. 西安医学院, 2021
- [6]基于定量化学蛋白质组学研究雷公藤红素抗缺血性脑卒中的靶点[D]. 刘丹丹. 中国中医科学院, 2021
- [7]白介素-37通过髓源性抑制细胞影响急性胰腺炎炎症反应的机制研究[D]. 丁黎莉. 吉林大学, 2021(01)
- [8]雷帕霉素通过lncRNA-LOC102553434介导细胞焦亡途径调控肢体缺血再灌注肺损伤的功能及机制研究[D]. 黄丹. 南昌大学, 2021(01)
- [9]酿酒酵母β-葡聚糖对RAW264.7细胞氧化应激、炎症和凋亡的缓解作用及机制[D]. 于春微. 内蒙古农业大学, 2021(01)
- [10]人参挥发油的抗炎活性研究[D]. 左旭. 吉林大学, 2021(01)