一、大蒜新素对MCMV感染小鼠转录因子T-bet和GATA-3基因表达的影响（论文文献综述）
于洋[1]（2016）在《鹿鹅鼻炎方对变应性鼻炎模型大鼠Th1/Th2细胞及相关细胞因子影响研究》文中进行了进一步梳理目的变应性鼻炎是由IgE介导的变态反应性疾病,是最常见的上呼吸道疾病,近年来患病率明显升高。尽管该病不会危及生命,但患病人数众多,除导致鼻部和眼部等局部器官症状外,它还可诱发支气管哮喘等多种并发症,对个人和社会产生严重影响。中医药治疗变应性鼻炎有一定优势,鹿鹅鼻炎方为我们临床上治疗变应性鼻炎常用方剂,目前对其作用机制尚不清楚。通过卵清蛋白致敏建立变应性鼻炎大鼠模型,研究鹿鹅鼻炎方对变应性鼻炎大鼠的治疗作用,进一步探讨其对Th1、Th2细胞的调控作用,为鹿鹅鼻炎方的临床使用提供理论依据。方法将60只SD大鼠,随机分为6组：空白对照组、模型对照组、西药对照组、高剂量中药组、中剂量中药组、低剂量中药组,每组10只。采用卵清蛋白致敏的方法建立变应性鼻炎大鼠模型,模型建立以后分别给予相应的药物干预,连续治疗14天后处死大鼠,取血清和鼻黏膜组织,分别运用ELISA法检测血清中OVA-sIgE、IL-4及IFN-y含量,HE、PAS及A＆S染色法观察鼻黏膜组织病理形态改变及检测肥大细胞和杯状细胞数目的变化,免疫组化技术检测鼻黏膜组织中IL-4及IFN-y表达情况,western-blot和RT-PCR法检测鼻黏膜组织中Th1、Th2细胞特异性转录因子T-bet和GATA-3基因的表达情况。结果1)造模后,模型对照组和各治疗组大鼠行为学评分均大于5分,高于空白对照组（p<0.05）。治疗后,各治疗组大鼠行为学评分低于模型对照组,差异有统计学意义；2.空白对照组大鼠鼻黏膜组织病理形态学表现为假复层纤毛柱状上皮结构完整、平滑,无炎症反应相关表现；模型组大鼠鼻黏膜上皮脱落、坏死而不连续,炎细胞浸润,组织间隙出血,腺体增生、肿胀,杯状细胞增生,黏膜表面分泌物增多；西药对照组大鼠鼻黏膜基本恢复正常,无明显炎症表现；鹿鹅鼻炎方组大鼠鼻黏膜较模型组有明显改善,仅有少量炎细胞浸润和局部黏膜上皮细胞的脱落。模型对照组大鼠鼻黏膜组织中肥大细胞、杯状细胞数目较空白组、治疗组增高,有统计学差异。3.血清ELISA检测,与空白组比较,模型组IgE、IL-4含量升高,IFN-γ含量降低；治疗后,与模型组比较,治疗组IgE、IL-4含量降低,IFN-γ含量升高。4.免疫组化检测,与空白组比较,模型组IL-4表达增强,IFN-γ表达降低；治疗后,与模型组比较,治疗组IL-4表达降低,IFN-γ表达增强。5.Western blot检测,与空白组比较,模型组GATA-3表达增强,T-bet表达降低；治疗后,与模型组比较,治疗组GATA-3表达降低,T-bet表达增强。6.RT-PCR检测,与空白组比较,模型组GATA-3表达增强,T-bet表达降低；治疗后,与模型组比较,治疗组GATA-3表达降低,T-bet表达增强,与Western blot结果一致。结论1)鹿鹅鼻炎方可以有效缓解变应性鼻炎大鼠流涕、喷嚏、挠鼻等症状,降低血清中IgE含量,减轻鼻部炎症反应,对变应性鼻炎大鼠起到治疗作用。2)鹿鹅鼻炎方可以降低变应性鼻炎大鼠Th2细胞因子IL-4含量,升高Thl细胞因子IFN-γ含量,纠正Thl/Th2细胞失衡,缓解其免疫变态反应；其作用机制可能是通过下调Th2特异性转录因子GATA-3的表达,促进Thl特异性转录因子T-bet的表达,调控Thl/Th2细胞,逆转以Th2细胞免疫反应占主导的免疫失衡。
黄永建,刘兴楼,王慧,郭珊,刘玲玲,李革,舒赛男,方峰[2]（2014）在《黄芩苷对MCMV感染小鼠Th1/Th2细胞特异性转录因子TBX21/GATA-3表达的影响》文中认为目的检测黄芩苷治疗后鼠巨细胞病毒（MCMV）感染模型鼠脾细胞中TBX21、GATA-3蛋白的表达强度,进一步研究黄芩苷在调节Th1/Th2平衡中的作用。方法建立MCMV播散性感染模型,在MCMV接种后24h给予黄芩苷腹腔注射60mg/kg,1次/d,共14d,并设立安慰剂对照组和正常对照组。分别于治疗后3、7和14d取小鼠脾脏,提取脾组织蛋白,用Western blot法分别检测Th1和Th2细胞特异性转录因子TBX21和GATA-3表达强度。结果治疗后3d,黄芩苷治疗组TBX21蛋白表达水平明显高于正常对照组和安慰剂对照组（P<0.01）。治疗后7d和14d,黄芩苷治疗组TBX21蛋白表达水平明显高于正常对照组（P<0.01,P<0.05）;而黄芩苷治疗组与安慰剂对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。治疗后3d,黄芩苷治疗组GATA-3蛋白表达水平明显低于正常对照组（P<0.01）;而与安慰剂对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。治疗后7d和14d,GATA-3蛋白表达水平3组之间差异无统计学意义（P>0.05）。结论黄芩苷在MCMV急性感染早期可明显上调TBX21蛋白表达,进而促进Th1细胞免疫应答,有利于机体清除病毒,并对MCMV诱导的Th1/Th2细胞网络改变有一定调节作用。
赵广高,苏全生,付近梅,朱生根[3]（2014）在《大蒜素防治运动性疲劳的研究进展》文中研究指明通过整理与分析国内外文献,对大蒜素干预运动性疲劳的作用进行综述。研究认为,大蒜素可通过影响运动机体的自由基代谢、骨骼肌与心肌的微损伤程度、炎症反应和心血管调节能力等方面,来防治运动性疲劳。医学与运动科学领域的相关研究成果提示大蒜素可能具有保护大强度运动机体Th1/Th2平衡的积极作用,而该作用的发生可能与T-bet和GATA3的不同调控作用有关。
李玉晓,张玲,何晓光,陈冬,李添应[4]（2012）在《大蒜新素对变应性鼻炎患者外周血白介素4和γ干扰素的影响》文中研究表明目的研究大蒜新素对变应性鼻炎患者外周血白介素4（interleukin,IL-4）和γ干扰素（interferon,IFN-γ）的影响.方法 66例研究对象均来自云南省中医医院,变应性鼻炎患者44例,其中男21例,女23例,年龄22～48岁（中位数36岁）,均经变应原皮肤点刺试验确诊,变应性鼻炎患者被分为药物治疗组和阳性对照组,各22例.药物治疗组患者口服大蒜新素40 mg,4次/d,共14 d;阳性对照组患者口服等剂量的淀粉胶囊,时间、频次相同.阴性对照组22例,其中男10例,女12例,年龄20～42岁（中位数33岁）,每日口服大蒜新素40 mg,4次/d,共14日.实验前与实验结束后各抽取外周静脉血5 mL,分离出血浆,用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆中IL-4和IFN-γ的浓度.结果药物治疗组、阳性对照组、阴性对照组分别有3例、3例、4例退出实验;药物治疗组、阳性对照组、阴性对照组服实验前、后血浆中IL-4的浓度（pg/mL）分别为53.20±10.10、51.94±10.40、35.67±5.69和35.87±8.82、50.27±9.68、33.53±4.86;血浆中IFN-γ的浓度（pg/mL）分别为45.66±9.43、46.04±10.87、65.11±10.93和57.01±13.34、45.64±8.90、71.07±8.51.实验前,药物治疗组与阳性对照组患者血浆IFN-γ和IL-4水平均无显着性差异（P>0.05）,分别与阴性对照组比较,变应性鼻炎患者血清中IL-4水平明显高于阴性对照组,而IFN-γ水平明显低于阴性对照组,均有显着性差异（P<0.05）.实验后,药物治疗组血浆IL-4水平明显低于阳性对照组,而IFN-γ水平明显高于阳性对照组,但仍低于阴性对照组,均有统计学意义（P<0.05）,药物治疗组IL-4水平接近阴性对照组,无显着性差异（P>0.05）.药物治疗组实验后IL-4水平较实验前明显下降,而IFN-γ水平较实验前明显升高,均有显着性差异（P<0.05）.阴性对照组实验后血清IFN-γ水平有所升高,有显着性差异（P<0.05）,而IL-4水平稍有下降,无统计学意义（P>0.05）.阳性对照组患者血浆IL-4水平和IFN-γ水平实验前、后无明显变化.结论大蒜新素能明显改善变应性鼻炎患者的临床症状,其作用机制可能是通过降低血浆中IL-4的浓度,同时升高IFN-γ水平,恢复Th1和Th2细胞因子的平衡.
刘瑾,方峰,彭新平[5]（2011）在《大蒜新素对鼠巨细胞病毒感染小鼠脾细胞IL-12基因转录、表达和功能的影响》文中研究表明目的:阐明大蒜新素对鼠巨细胞病毒（MCMV）感染小鼠脾细胞TH1类细胞调控因子IL-12基因转录、表达和功能的影响和其在抗MCMV机制中的作用。方法:60只BALB/c小鼠随机分成大蒜新素治疗组（20只）、安慰剂组（20只）和正常对照组（20只）。治疗组在造模后24 h开始腹腔注射大蒜新素一般剂量（25 mg·kg-1）,每天1次,共14 d;安慰剂组和正常对照组注射等量生理盐水。各组分别于治疗后第3,5,7,10,14天各处死4只小鼠,RT-PCR法检测各组小鼠脾细胞IL-12 p35,IL-12 p40 mRNA表达强度;双抗体夹心ELISA法检测脾细胞培养上清中TH1细胞调控因子IL-12 p70蛋白和TH1类细胞因子IFN-γ的蛋白表达水平。结果:安慰剂组在感染后第3天IL-12 p70蛋白和IL-12 p35 mRNA表达显着增高,但第5天后急剧下降,显着低于正常小鼠;IFN-γ在感染后第3天达峰值,随后逐渐下降,在感染后第1014天降至正常水平;而p40 mRNA则从感染第3天开始持续高水平表达。治疗组在治疗后第3天IL-12 p70蛋白,IL-12 p35,IL-12 p40 mRNA水平均显着增高达峰值（P<0.05）,但随后快速下降,在第514天稳定在正常细胞水平;IFN-γ亦在治疗后第3天表达至峰值,第5天稍有下降,但随后表达逐渐上调,在治疗后第714天显着高于安慰剂组和正常对照组（P<0.01）。结论:大蒜新素能完全纠正MCMV感染后第514天诱导的IL-12 p70蛋白和IL-12 p35 mRNA表达下调以及IL-12 p40 mRNA表达上调;同时还能持续上调IFN-γ表达,提示其还可能通过其他途径促进IFN-γ分泌。大蒜新素的上述作用有助于纠正MCMV诱导的TH1/TH2细胞网络失衡,增强特异性细胞免疫功能和抗病毒因子的分泌而有利于机体清除MCMV病毒,可能是其抗MCMV效应的另一作用机制。
黄永建[6]（2011）在《黄芩苷对小鼠巨细胞病毒肝炎的治疗作用及其机制研究》文中研究说明[目的]1)在小鼠巨细胞病毒肝炎模型证实黄芩苷的治疗作用和抗病毒效应；2)探寻黄芩苷诱导抗CMV免疫的作用及其可能环节和机制。【方法】1)黄芩苷的肝毒性实验：根据成人的中效剂量计算小鼠用药剂量为60 mg/kg,按等倍递加方式设计药物剂量梯度为60 mg/kg、120 mg/kg、240 mg/kg和480 mg/kg。正常小鼠腹腔注射不同剂量黄芩苷,每天1次,连续14天后检测小鼠血清谷丙转氨酶水平及肝组织病理变化,观察黄芩苷肝毒性作用；2)动物模型建立：按照徐翼的方法,选择4.5周龄BALB/c小鼠腹腔接种在免疫抑制小鼠体内增毒的MCMV Smith株,建立MCMV播散性感染模型。在MCMV接种后24小时开始给予黄芩苷腹腔注射60mg/kg,每天1次,共14天；设立安慰剂对照组和正常对照组；3)肝病变评估：于给药后3、7和14天观察肝脏组织病变,用肝组织病变活动性积分（HAI）评估肝组织病变,同时检测血清sALT反映肝细胞功能变化；4)病毒学评估：用蚀斑法测定黄芩苷治疗14天唾液腺组织内感染性病毒量,并与安慰剂对照组比较；5)Th1/Th2类细胞因子表达：分别于给药后3、7和14天取小鼠脾细胞,经刀豆素、灭活MCMV刺激体外培养48小时,收集脾细胞培养上清液,用双抗体夹心ELISA法检测上清中Th1类细胞因子IFN-γ水平,设立不加刺激物对照组。同时检测各时间点小鼠血清中Th2类细胞因子IL-4水平；6)Th1和Th2细胞特异性转录因子TBX21和GATA-3蛋白表达：按上述时间点提取脾组织蛋白,用Western blot法检测Th1和Th2细胞特异性转录因子TBX21和GATA-3表达强度,设立内参蛋白,以校正值K进行半定量分析。【结果】1)黄芩苷的肝毒性作用：60mg/kg,120mg/kg,240 mg/kg和480 mg/kg腹腔注射黄芩苷共14天,未见小鼠死亡,未出现其他异常反应。各组小鼠血清ALT水平与正常对照组相比无明显差异,肝脏切片亦无明显异常病理变化；2)肝功能改变：与正常对照组相比,安慰剂对照组小鼠ALT水平在3天时明显升高,7天时达高峰,14天时下降。与安慰剂组相比,黄芩苷治疗组ALT水平在3天时即有明显下降,7天时进一步下降,14天时接近正常；3)肝组织病理改变：安慰剂对照组肝组织HAI均值在第3天达高峰,以后逐渐下降；黄芩苷治疗组肝组织HAI均值也在第3天达高峰,但肝损害明显轻于安慰剂对照组,以后肝病变逐渐减轻,在第7天和14天时HAI均值都显着低于安慰剂对照组；4)唾液腺感染性病毒量变化：黄芩苷治疗14天时,小鼠唾液腺的感染性病毒量明显低于安慰剂对照组；5)Th1类细胞因子表达：黄芩苷治疗组和安慰剂对照组脾细胞上清中IFN-γ都在7天时达高峰,在3天、7天和14天时都高于正常对照组水平,有统计学差异。与安慰剂组比较,黄芩苷治疗组在3天和7天时都显着高于安慰剂对照组,但到14天时,黄芩苷治疗组已明显低于安慰剂组；6)Th2类细胞因子表达：安慰剂对照组3天时血清IL-4显着低于正常对照组,第7天升至正常水平；到第14天显着高于正常对照组。黄芩苷治疗组IL-4水平在3天时亦明显低于正常对照组；第7天达高峰,略高于正常对照组,但明显高于安慰剂组；第14天仍略高于正常对照组,但明显低于安慰剂组。7)TBX21蛋白表达：安慰剂对照组3天时TBX21蛋白表达略低于正常对照组；但7天和14天时都明显高于正常对照组；黄芩苷治疗组3天时TBX21蛋白表达显着高于正常对照组及安慰剂组；7天时达高峰,14天时略有下降,亦都明显高于正常对照组,但与安慰剂组接近；8)GATA-3蛋白表达：安慰剂组和黄芩苷治疗组3天时GATA-3蛋白表达都显着低于正常对照组；但在7天和14天时都接近正常对照组表达水平,而黄芩苷治疗组与安慰剂组之间比较无明显差异。【结论】1)使用高达8倍中效剂量的黄芩苷对小鼠肝脏组织无毒副作用,表明黄芩苷是一种安全的中药制剂；2)在整体水平,黄芩苷能显着减轻MCMV感染所致肝组织病理损害,促进sALT恢复正常,减少机体唾液腺内感染性病毒量。证明黄芩苷在体内具有抗巨细胞病毒效应,并对MCMV肝炎有治疗作用；3)在MCMV急性感染早期,机体主要启动Th1介导的细胞免疫来快速清除病毒；4)黄芩苷在MCMV急性感染早期可明显上调TBX21蛋白表达进而促进Th1细胞免疫应答而有利于机体清除病毒,并对MCMV诱导的Th1/Th2细胞网络改变有一定调节作用。
王克玲[7]（2011）在《FOXP3基因过表达腺病毒转染未成熟树突状细胞对实验性变态反应性脑脊髓炎免疫耐受作用的研究》文中研究表明目的:多发性硬化（multiple sclerosis, MS）是一种主要由T细胞介导,以中枢神经系统白质脱髓鞘病变为特点的自身免疫性疾病。实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）是MS的经典动物模型。目前病因及发病机制尚未明确。大量的研究表明MS和EAE的发生与T细胞的异常活化有关,发现CD4+T细胞在MS的发病机理中处于核心地位。既往比较认可的机制为Th1/Th2失衡导致MS。Th1通过分泌IL-2、IL-12、IFN-γ等因子,加重MS病情;Th2通过分泌IL-4、IL-5、IL-10等因子,缓解病情。新近又提出Th17/Treg失衡导致MS,Th17通过分泌IL-17加重炎症,调节性T细胞（regulatoryT cell, Treg）可抑制免疫反应,减轻炎症。对免疫耐受机制及其诱导方法的研究,已成为目前MS免疫研究的重点之一。树突状细胞（dendritic cell, DC）是迄今为止惟一能刺激初始T细胞活化、增殖的抗原提呈细胞（antigen presenting cell, APC）。DC是特异性免疫应答的启动者,在MS的病理免疫应答中起关键作用。近来研究发现DC在免疫调节中发挥免疫应答和免疫耐受的双重作用,故而提出了耐受性DC（ tolerogenic dendritic cell, tDC）的概念。即DC向T细胞提呈抗原可有两种不同结果:免疫刺激（免疫原性）或免疫抑制（耐受原性）。根据成熟程度,将DC分为未成熟DC （ immature DC, imDC）和成熟DC （mature DC, mDC）。两种DC形态、细胞表型和功能不同。DC可通过细胞表面分子和分泌细胞因子的改变,调节抗原特异性T细胞分化,引起不同的免疫应答。不同类型的DC具有不同的特征,imDC能诱导免疫耐受,mDC有很强的抗原提呈能力,能够激发初始T细胞的活化。基因修饰DC,诱导耐受性DC,从而治疗多发性硬化等自身免疫病,已成为目前研究的热点。Foxp3（forkhead/winged helix transcription factor ）称为叉状头/翅膀状螺旋转录因子,是FOXP3+Tregs特异性转录因子,在调控Treg细胞的发育和功能上起重要作用。将FOXP3基因转染细胞,诱导产生有调节功能的细胞,为调节性细胞用于多发性硬化等自身免疫性疾病的临床免疫治疗提供了可能。吲哚胺-2,3双加氧酶（Indoleamine 2, 3-xygenase, IDO）,是色氨酸分解代谢的限速酶,可在局部形成低色氨酸环境。DC表达IDO参与了机体的免疫耐受。DC表达IDO,通过色氨酸衰竭和毒性代谢产物来诱导T细胞无能,抑制T细胞增殖、促进凋亡。新近发现IDO还可以诱导产生Treg,进而介导免疫耐受。两者之间存在着相互促进的关系,即IDO可以诱导产生新的Treg,而Treg又可诱导IDO的表达。Treg可通过表面的细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（cytotoxic T-lymphocyte associated antigen-4, CTLA-4）与DC表面B7-1/B7-2结合,激发DC细胞IDO的高表达。本研究应用FOXP3基因过表达腺病毒转染imDC,观察转染后imDC（DC.FOXP3）的生物学特性、细胞表型及自身各种细胞因子的表达和分泌的变化。在体外观察DC.FOXP3对EAE模型小鼠脾脏CD4+T细胞的影响,并用IDO抑制剂1-甲基色氨酸（1-methyl tryptophan, 1-MT）拮抗IDO作用,从而探讨DC.FOXP3诱导免疫耐受的机制。为临床防治MS提供新的思路。方法:1小鼠FOXP3基因过表达重组腺病毒载体的构建和鉴定小鼠FOXP3基因为模板,PCR扩增目的基因,并将其克隆到腺病毒载体pAV-MCMV-GFP-3FLAG上,测序后腺病毒包装、纯化、鉴定,测病毒滴度。分别将构建的质粒和腺病毒转染293细胞,通过荧光显微镜检测表达,观察到GFP的表达,Western blot方法检测293细胞中FOXP3蛋白的表达。2小鼠FOXP3基因过表达腺病毒转染imDC及鉴定体外从小鼠骨髓分离、培养、磁珠纯化DC,并采用光镜、扫描电镜、透射电镜观察细胞形态,流式细胞技术（flow cytometry, FCM）鉴定CD11c、MHCII、CD80、CD86的表达水平,CCK-8法检测混合淋巴细胞反应（mixed lymphocyte reaction, MLR）。FOXP3基因重组腺病毒转染小鼠骨髓源imDC后用倒置荧光显微镜观察绿色荧光,测定转染效率,分别用RT-PCR和western blot法,检测FOXP3基因转染imDC中FOXP3基因在mRNA及蛋白水平的表达。3 FOXP3基因过表达腺病毒转染对小鼠imDC生物学特性和表型的影响FOXP3基因重组腺病毒转染imDC后,采用扫描电镜和透射电镜观察转染后imDC的形态,FCM鉴定CD11c、MHCII、CD80、CD86的表达水平,用实时荧光定量PCR（RealtimePCR, QPCR）的方法检测了转染后imDC的mRNA基因水平各种细胞因子的表达。用ELISA的方法检测DC.FOXP3的细胞因子的分泌。4 FOXP3基因过表达腺病毒转染imDC诱导EAE小鼠CD4+T细胞免疫耐受的作用MOG35-55皮下注射小鼠构建EAE模型。病理切片观察小鼠脑部和脊髓的炎症变化。磁珠分离EAE小鼠脾脏CD4+T细胞与DC.FOXP3共培养。通过CD4+T细胞计数及CCK8法检测DC.FOXP3刺激CD4+T细胞增殖的能力。用AnnexinⅤ-7AAD检测DC.FOXP3对CD4+T凋亡的影响。DC.FOXP3组与CD4+CD25-T细胞共培养, FCM检测CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞数量占CD4+细胞数量的百分比。磁珠分选共培养体系中的CD4+T细胞,采用QPCR检测CD4+T细胞中各种细胞因子mRNA的表达。ELISA法检测上清中的细胞因子。应用IDO拮抗剂1-MT后观察CD4+T细胞数量,凋亡细胞数,CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞数量的改变,CD4+T细胞中各种细胞因子mRNA的表达和上清中的细胞因子的改变。结果:1小鼠FOXP3基因过表达重组腺病毒载体的构建和鉴定PCR扩增FOXP3基因片段并将其克隆到腺病毒载体pAV-MCMV-GFP-3FLAG上,测序与Pubmed基因库FOXP3基因序列相符。重组腺病毒的包装、鉴定成功。测定腺病毒滴度为1.25X1011PFU/ml。通过荧光显微镜观察荧光强度高,观察到GFP的表达。Western Blot检测转染的293细胞,可观察到Foxp3-GFP-FLag融合蛋白阳性条带,基本判断FOXP3蛋白表达。2小鼠FOXP3基因过表达腺病毒转染imDC及鉴定①DC形态学改变:DC在光镜下观察,培养第5天的细胞有少量突起,集落数量增多。符合imDC形态。扫描电镜观察,imDC细胞形态呈圆形和类圆形,细胞表面皱褶多,突起少、短、细。mDC细胞形态多样,表面大量皱褶,有多量树枝状突起,粗细不均,较长。透射电镜观察,imDC细胞形态比较规则,表面突起短少,核多偏向一侧,胞浆内有较多吞饮泡及溶酶体,中等量的线粒体、内质网、核糖体。有的可见失去正常形态的“C”形溶酶体。mDC细胞形态不规则,表面有较长的突起,胞体较大,胞核不规则,胞浆内囊泡状结构、溶酶体减少,细胞器丰富,有多量线粒体,内质网、核糖体、高尔基体。②流式细胞仪检测DC细胞表面分子:磁珠分选imDC和mDC均高表达CD11c,纯度大于90%。imDC上细胞表面分子分别为MHCII（27.2%）、CD80（27.5%）、CD86（29.5%）呈低表达,mDC上分别为MHCII（99%）、CD80（98.8%）、CD86（98.4%）显着高表达。③MLR中DC对同种异基因T细胞的刺激增殖能力:imDC和mDC两组DC刺激T细胞增殖的能力均随DC所占比例增大而增强。相同反应比例imDC刺激T细胞的增殖能力,显着低于mDC,两组间差异均有统计学意义。④倒置荧光显微镜下观察:转染目的基因AD-FOXP3组imDC（DC.FOXP3）和转染空病毒AD-GFP组imDC（DC.GFP）均可见绿色荧光,未转染组imDC（DCN）未见荧光,表明FOXP3基因过表达腺病毒转染成功,转染率大于90%。⑤RT-PCR可检测到DC.FOXP3中FOXP3 mRNA的表达,Western Blot可检测到DC.FOXP3中FOXP3蛋白的表达。而DC.GFP和DCN中不能检测到FOXP3 mRNA和蛋白表达。3 FOXP3基因过表达腺病毒转染对小鼠imDC生物学特性和表型的影响①扫描电镜和透射电镜观察DC.FOXP3和DC.GFP与DCN相比,维持了imDC的未成熟表现。②FCM检测细胞表型:AD-FOXP3转染对imDC表面CD11c、MHC-II、CD80、CD86等分子的表达无影响,仍以未成熟型为主。③QPCR检测结果显示:在mRNA水平上,与DCN和DC.GFP比较,DC.FOXP3上FOXP3明显高表达,而对照组无表达。DC.FOXP3的Th1类细胞因子IFN-γ和Th17类细胞因子IL23、IL17表达明显减低,而Th2类细胞因子IL-10和IDO表达明显增高。④ELISA检测结果显示,与对照组相比,DC.FOXP3培养液上清中Th1类细胞因子: IFN-γ和Th17类细胞因子IL17分泌明显减低,而Th2类细胞因子IL-10分泌增高。4 FOXP3基因过表达腺病毒转染imDC诱导EAE小鼠脾脏CD4+T细胞免疫耐受的作用①本部分实验成功建立了小鼠EAE模型。光镜下病理切片观察HE染色示EAE组小鼠的大脑、颈、腰段脊髓有大量炎性细胞浸润，血管周围呈袖套样改变，主要分布在脑室周围及脊髓腰膨大区域的白质部分，并伴有脊膜增厚。对照组小鼠大脑和脊髓未见异常。②imDC与EAE小鼠CD4+T细胞共培养，与DCN和DC.GFP比较，DC.FOXP3能抑制EAE小鼠脾脏CD4+T细胞增殖，表现为CD4+T细胞数量减少和CCK-8检测DC.FOXP3刺激CD4+T增殖的能力减低。AnnexinⅤ-7AAD检测结果显示DC.FOXP3促进CD4+T细胞凋亡。③imDC与CD4+CD25-T细胞共培养,FCM检测DC.FOXP3能诱导CD4+CD25-T细胞向CD4+CD25+FOXP3+Treg的转化。④QPCR检测共培养体系中的CD4+T细胞中各种细胞因子的mRNA的表达，结果显示：DC.FOXP3抑制Th1细胞的转录子T-bet及细胞因子IFN-r和Th17细胞的转录子RORγt和细胞因子IL-17及促进IL-17分泌的IL-23的mRNA表达；上调Th2细胞的转录子GATA-3及细胞因子IL-4和Treg细胞的转录子FOXP3及细胞因子CTLA-4的mRNA表达。⑤ELISA检测结果显示：与DCN和DC.GFP比较，DC.FOXP3与CD4+T细胞共培养上清中IFN-γ、IL-17含量减低，IL-4、IL10含量增高。⑥DC.FOXP3与CD4+T细胞共培养体系中添加IDO拮抗剂1-MT后CD4+T细胞数量增加，凋亡细胞数减少，对CD4+CD25-T细胞极化作用减弱，Th1、Th17细胞的转录子及细胞因子mRNA水平增高，Th2、Treg细胞的转录子及细胞因子mRNA水平减低。ELISA法检测共培养液中分泌的细胞因子水平，IFN-γ、IL-17增高、IL-4、IL10减低。结论：1成功构建FOXP3基因过表达重组腺病毒载体。2成功培养、诱导、扩增大量DC，并鉴定了imDC和mDC的生物学特性和细胞表型。成功构建FOXP3基因高表达imDC细胞模型。3 AD-FOXP3转染后的imDC细胞表型无改变，下调自身Th1、Th17类炎性因子和上调Th2类抑制炎症因子的表达和分泌。并且细胞高表达IDO，从而增强了imDC的耐受原性。4 AD-FOXP3转染imDC可以在体外抑制EAE小鼠脾脏CD4+T细胞增殖、促进CD4+T细胞的凋亡、诱导Treg产生、抑制Th1和Th17功能,增强Th2和Treg功能,逆转了Th1/Th2和Th17/Treg细胞失衡。用IDO拮抗剂1-MT后EAE小鼠脾脏CD4+T细胞功能恢复,说明了DC.FOXP3可能通过激活IDO的功能促进免疫耐受。
李亚男,舒赛男,王慧,刘兴楼,董永绥,方峰[8]（2010）在《大蒜新素体内外抑制小鼠巨细胞病毒感染诱导的调节性T细胞扩增实验研究》文中研究说明目的在体内外水平研究大蒜新素对小鼠巨细胞病毒（murine cytomegalovirus,MCMV）感染导致调节性T细胞（regulatory T cells,Treg）异常扩增的抑制作用。方法 72只MCMV感染小鼠随机分为安慰剂组和大蒜新素治疗组;并设72只同期模拟感染小鼠为对照,随机分为模拟感染对照组和大蒜新素对照组。分别于大蒜新素处理后1、7、14、28、60、120 d处死小鼠,获得脾细胞待测。采用Western blotting法检测脾细胞中Foxp3的蛋白表达强度;流式细胞术分析CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞在脾细胞中所占比率的变化。采用小鼠胚胎成纤维细胞对大蒜新素的最大耐受浓度处理MCMV感染的胚胎成纤维细胞3 d后,采用Real-time PCR法和Westernblotting法分别检测T细胞中Foxp3 mRNA和蛋白的表达水平。结果整体研究发现,大蒜新素对正常小鼠脾细胞中Foxp3蛋白表达和Treg细胞比率均无显着影响;但是在MCMV感染小鼠,大蒜新素可在感染慢性期显着减少Foxp3蛋白表达强度、降低调节性T细胞比率。体外细胞模型发现,最大耐受浓度的大蒜新素加入共培养体系后可部分拮抗MCMV诱导的Foxp3基因和蛋白表达上调。结论大蒜新素在体内外均可显着纠正MCMV感染导致的Treg异常扩增。大蒜新素通过影响Treg增殖进而增强抗病毒免疫而有利于机体清除CMV病毒,可能是大蒜新素诱导抗CMV免疫的另一重要机制。
陈冬,李玉晓,李添应,文卫平,史剑波,何晓光[9]（2010）在《大蒜新素对变应性鼻炎大鼠转录因子T-bet和GATA-3表达的影响》文中研究表明目的探讨大蒜新素对大鼠变应性鼻炎（allergic rhinitis,AR）模型血淋巴细胞中转录因子T-bet和GATA-3表达的影响。方法健康SD大鼠30只,雌雄各半,以随机数字表法分为3组,即药物组、对照组和空白组,每组10只。药物组用卵清蛋白（ovalbumin,OVA）辅以氢氧化铝和灭活百日咳杆菌佐剂建立AR模型,成功后每日腹腔注射大蒜新素0.4 ml,剂量为25 mg/（kg·d）,连用10 d。对照组造模方法同药物组,成功后每日腹腔注射生理盐水0.4 rnl,连用10 d。空白组除无OVA致敏和激发外,其他处置方法同对照组。采集心脏血2 ml,分离出血浆和淋巴细胞,采用酶联免疫吸附（ELISA）方法检测血浆中白细胞介素（interleukin,IL）4和γ干扰素（interferon,IFN）的含量,采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测淋巴细胞中转录因子T-bet和GATA-3的表达,并应用半定量方法计算二者的相对表达量。结果药物组、对照组和空白组大鼠血浆中IL-4的水平（（?）±s,以下同）分别是（6.292±1.734）、（14.252±1.971）、（4.916±0.600）pg/ml;IFN-γ的水平分别是（24.338±2.375）、（12.364±1.749）、（16.136±2.012）pg/ml。药物组血浆中IL-4的水平低于对照组,差异有统计学意义（t=4.23,P<0.05）,与空白组比较,差异无统计学意义（t=1.01,P>0.05）。药物组血浆中IFN-γ的水平高于对照组和空白组,差异有统计学意义（t值分别为4.61、5.79,P值均<0.05）。对照组血浆中IFN-γ的水平和空白组比较,差异无统计学意义（t=1.17,P>0.05）。药物组、对照组和空白组血淋巴细胞中转录因子GATA-3相对表达量的中位数（M）分别是0.826、1.029和0.474,3组间差异有统计学意义（x2=6.599,P=0.019）;转录因子T-bet的相对表达量中位数（M）分别为1.245、0.280和0.544,3组间差异有统计学意义（x2=9.884,P=0.007）。对照组GATA-3相对表达量高于空白组和药物组,差异有统计学意义（x2值分别为10.113、2.384,P值均<0.05）。药物组GATA-3相对表达量高于空白组,T-bet相对表达量明显高于对照组和空白组,差异均有统计学意义（x2值分别为3.784、16.021和14.103,P值均<0.05）。结论大蒜新素能明显增强大鼠AR模型血淋巴细胞中转录因子T-bet的表达并减弱GATA-3的表达。
葛海霞,刘兴楼,舒赛男,李亚男,罗丹,方峰[10]（2009）在《大蒜新素对全身播散型人巨细胞病毒感染小鼠脏器病变的治疗作用》文中指出目的观察大蒜新素对巨细胞病毒全身播散感染小鼠肝脏、肺、肾脏、心肌组织病理变化的影响,探讨大蒜新素对巨细胞病毒全身播散感染小鼠的治疗效果。方法将60只BALB/c小鼠腹腔接种MCMV（Smith株）后随机分为实验组和对照组各30只,接种MCMV,24h后实验组给予大蒜新素25mg·kg-1.d-1腹腔注射,qd;对照组给予等量0.9%氯化钠注射液,共120d。给药后1,3,7,14,28,45,60,75,90和120d两组各处死3只小鼠,显微镜下观察肝、肺、肾、心肌组织病理变化并进行评分。结果两组肝、肺和心肌组织病理评分治疗后7d达最高值,肾组织病理评分治疗后14d达最高值,以后逐渐下降。与对照组比较,实验组脏器组织病变轻。两组肝脏HAI评分治疗14d后差异有极显着性（P<0.01）,以后差别逐渐增大;实验组肺组织Gloor评分给药28d后与对照组比较差异有极显着性（P<0.01）;肾组织与心肌组织病理评分治疗14d后与对照组比较差异有显着性（均P<0.05）,90d差异更显着（P<0.01）。此外,在给药后120d,实验组肝、肺组织接近正常,肾脏和心肌仍有一定程度病理损伤。结论大蒜新素治疗2周后能够明显减轻模型小鼠肝、肺、肾脏和心肌病理损伤,对肝脏和肺的治疗效果尤其显着。
二、大蒜新素对MCMV感染小鼠转录因子T-bet和GATA-3基因表达的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、大蒜新素对MCMV感染小鼠转录因子T-bet和GATA-3基因表达的影响（论文提纲范文）
（1）鹿鹅鼻炎方对变应性鼻炎模型大鼠Th1/Th2细胞及相关细胞因子影响研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 变应性鼻炎的现代医学研究概述 |
| 1 临床定义分类 |
| 2 变应性鼻炎流行病学 |
| 3 变应性鼻炎病因 |
| 4 变应性鼻炎发病机制 |
| 5 临床症状 |
| 6 诊断 |
| 7 治疗 |
| 8 疗效评价 |
| 参考文献 |
| 综述二 变应性鼻炎的中医药研究进展 |
| 1 古籍记载研究 |
| 2 病因病机认识 |
| 3 证型治法归纳 |
| 4 变应性鼻炎治疗研究 |
| 5 中医药治疗变应性鼻炎实验机制研究 |
| 6 张纾难教授临床治疗变应性鼻炎经验总结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 实验研究 鹿鹅鼻炎方对变应性鼻炎大鼠Th1/Th2细胞及相关细胞因子影响研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（2）黄芩苷对MCMV感染小鼠Th1/Th2细胞特异性转录因子TBX21/GATA-3表达的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2药物 |
| 1.1.3 病毒 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 MCMV感染小鼠模型的建立 |
| 1.2.2实验分组及药物治疗方案 |
| 1.2.3 Western |
| 1.3 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 黄芩苷对MCMV感染小鼠脾脏中TBX21蛋白表达的影响 |
| 2.2 黄芩苷对MCMV感染小鼠脾脏GATA-3蛋白表达的影响 |
| 3 讨论 |
（3）大蒜素防治运动性疲劳的研究进展（论文提纲范文）
| 1 大蒜素对大强度运动机体自由基代谢的影响 |
| 2 大蒜素对大强度运动机体肌细胞微损伤程度的影响 |
| 3 大蒜素对大强度机体机能状态、炎症反应和心血管调节能力等的影响 |
| 4 大蒜素对大强度运动机体Th1/Th2 平衡的影响 |
| 5 结语 |
（4）大蒜新素对变应性鼻炎患者外周血白介素4和γ干扰素的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 临床资料 |
| 1.2 主要试剂和设备 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1 服药方法 |
| 1.3.2 观察指标 |
| 1.3.3 标本的采集、分离、存放 |
| 1.3.4 血清中IL-4、IF N-γ浓度的测定（双抗体夹心ELISA法） |
| 1.4 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
（6）黄芩苷对小鼠巨细胞病毒肝炎的治疗作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 黄芩苷对巨细胞病毒感染小鼠肝脏病变的治疗作用 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 黄芩苷治疗对MCMV感染小鼠TH1和TH2类细胞因子表达的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 黄芩苷治疗对MCMV感染小鼠TH1/TH2细胞特异性转录因子TBX21/GATA-3表达的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文小结 |
| 综述 婴儿胆汁淤积性肝病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录一 |
| 附录二 |
| 致谢 |
（7）FOXP3基因过表达腺病毒转染未成熟树突状细胞对实验性变态反应性脑脊髓炎免疫耐受作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 小鼠FOXP3 基因过表达重组腺病毒载体的构建和鉴定 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 小鼠FOXP3 基因过表达腺病毒转染imDC 及鉴定 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 FOXP3 基因过表达腺病毒转染对小鼠imDC 生物学特性和表型的影响前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 FOXP3 基因过表达腺病毒转染 imDC 诱导 EAE 小鼠 CD4+T 细胞免疫耐受的作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述一 白细胞介素新成员与多发性硬化研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 免疫耐受与多发性硬化 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）大蒜新素体内外抑制小鼠巨细胞病毒感染诱导的调节性T细胞扩增实验研究（论文提纲范文）
| 1 材料 |
| 1.1 动物: |
| 1.2 病毒: |
| 1.3 药物: |
| 2 方法 |
| 2.1 体内实验 |
| 2.1.1 大蒜新素应用剂量的确定: |
| 2.1.2 MCMV 感染小鼠模型的建立和实验分组: |
| 2.1.3 Western blotting 法检测Foxp3 蛋白水平: |
| 2.1.4 流式细胞术检测CD4+CD25+Foxp3P+ 细胞比率: |
| 2.2 体外实验 |
| 2.2.1 细胞纯化与培养: |
| 2.2.2 大蒜新素在细胞水平应用剂量的确定: |
| 2.2.3 细胞模型建立与分组: |
| 2.2.4 Western blotting 检测Foxp3 蛋白水平: |
| 2.2.5 RT-PCR 方法检测T细胞中Foxp3 mRNA 表达: |
| 2.3 统计学处理: |
| 3 结果 |
| 3.1 整体实验研究大蒜新素对 MCMV 感染小鼠 Foxp3 表达的影响 |
| 3.1.1 大蒜新素对Foxp3 蛋白表达的影响: |
| 3.1.2 大蒜新素对 Treg细胞比率的影响: |
| 3.2 大蒜新素体外干预实验 |
| 3.2.1 最大耐受质量浓度测定结果: |
| 3.2.2 大蒜新素对Foxp3 表达的影响: |
| 4 讨论 |
（10）大蒜新素对全身播散型人巨细胞病毒感染小鼠脏器病变的治疗作用（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 观察指标与观察方法 |
| 1.4 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 两组大鼠肝组织病理特点及变化 |
| 2.2 两组小鼠肺组织病理变化 |
| 2.3 两组小鼠肾组织病理变化 |
| 2.4 两组小鼠心肌组织病理变化 |
| 3 讨论 |
四、大蒜新素对MCMV感染小鼠转录因子T-bet和GATA-3基因表达的影响（论文参考文献）
- [1]鹿鹅鼻炎方对变应性鼻炎模型大鼠Th1/Th2细胞及相关细胞因子影响研究[D]. 于洋. 北京中医药大学, 2016(08)
- [2]黄芩苷对MCMV感染小鼠Th1/Th2细胞特异性转录因子TBX21/GATA-3表达的影响[J]. 黄永建,刘兴楼,王慧,郭珊,刘玲玲,李革,舒赛男,方峰. 华中科技大学学报(医学版), 2014(06)
- [3]大蒜素防治运动性疲劳的研究进展[J]. 赵广高,苏全生,付近梅,朱生根. 现代预防医学, 2014(05)
- [4]大蒜新素对变应性鼻炎患者外周血白介素4和γ干扰素的影响[J]. 李玉晓,张玲,何晓光,陈冬,李添应. 昆明医科大学学报, 2012(06)
- [5]大蒜新素对鼠巨细胞病毒感染小鼠脾细胞IL-12基因转录、表达和功能的影响[J]. 刘瑾,方峰,彭新平. 中国中药杂志, 2011(12)
- [6]黄芩苷对小鼠巨细胞病毒肝炎的治疗作用及其机制研究[D]. 黄永建. 华中科技大学, 2011(10)
- [7]FOXP3基因过表达腺病毒转染未成熟树突状细胞对实验性变态反应性脑脊髓炎免疫耐受作用的研究[D]. 王克玲. 河北医科大学, 2011(10)
- [8]大蒜新素体内外抑制小鼠巨细胞病毒感染诱导的调节性T细胞扩增实验研究[J]. 李亚男,舒赛男,王慧,刘兴楼,董永绥,方峰. 中草药, 2010(09)
- [9]大蒜新素对变应性鼻炎大鼠转录因子T-bet和GATA-3表达的影响[J]. 陈冬,李玉晓,李添应,文卫平,史剑波,何晓光. 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志, 2010(02)
- [10]大蒜新素对全身播散型人巨细胞病毒感染小鼠脏器病变的治疗作用[J]. 葛海霞,刘兴楼,舒赛男,李亚男,罗丹,方峰. 医药导报, 2009(05)