一、髋部和骨盆骨折患者肿瘤坏死因子-α、粘附分子-1的测定及其与静脉血栓形成的关系（论文文献综述）
热甫开提·阿不都哈力克[1]（2021）在《NLRP3/IL-1/NF-κB信号通路及IL-1基因多态性在VTE中作用及机制研究》文中研究指明
沈美丽[2]（2021）在《具有活性氧和剪切应力双重响应药物递送系统及用于动脉粥样硬化治疗的研究》文中认为动脉粥样硬化是心血管疾病的关键发病机制,可导致心肌梗死、心绞痛、缺血性心脏病、缺血性脑卒中、中风等心血管疾病的发生。动脉粥样硬化性心血管疾病已成为全球主要的公共卫生问题,即使在医疗水平十分发达的现在,心血管疾病在全球的死亡率依然没有降低,反而成为全球人口发病率和死亡率最高的主要原因。未来10年心血管病患病人数仍将快速增长,因此吸引了越来越多的研究人员参与到了这场遏制动脉粥样硬化发展的“战斗”中。研究表明,炎症贯穿了动脉粥样硬化发展的整个过程,脂质也为其发展起到了重要的推动作用,这些因素赋予了动脉粥样硬化的特殊微环境,如高水平的活性氧（ROS）、高的剪切应力以及高含量的脂质,ROS和脂质水平的降低起到延缓动脉粥样硬化发展进程的作用。本论文以高水平的ROS和高的剪切应力为研究对象,以红细胞（RBCs）作为仿生载体,探究了具有ROS和剪切应力响应的载药纳米粒子和载药胶束的构建方法,及对动脉粥样硬化的治疗效果。主要研究内容如下:（1）构筑了具有剪切应力和ROS双重响应的仿生纳米载药系统,该系统由动脉粥样硬化治疗药物阴离子型辛伐他汀酸（SA）、巯基修饰的阳离子型聚乙烯亚胺（PEI-SH）和RBCs组成,利用静电吸附得到了自组装式载药纳米粒子SA PEI,并将其吸附到红细胞膜上得到了SA PEI@RBCs。SA PEI的载药量为44.4±2.7%,能够响应ROS实现药物释放,体外剪切模型结果证明SA PEI@RBCs具有剪切应力响应。Fe Cl3模型结果证明SA PEI@RBCs具有最佳的治疗效果且拥有良好的体内安全性。（2）设计了负载辛伐他汀酸（SA）的交联树枝状大分子纳米粒子（SA PAM）,并将其吸附于RBCs表面,成功制备了具有ROS和剪切应力双重敏感的给药系统SA PAM@RBCs,并将其用于动脉粥样硬化的治疗。同SA PEI@RBCs相比,在SA PAM@RBCs体系中,纳米颗粒的载药量提高到65.3±2.1%,并能以H2O2触发的方式持续释放SA,能显着降低LPS刺激的RAW 264.7细胞中过量的H2O2水平。剪切敏感模型证明,在低剪切应力（20 dynes/cm2）作用下,SA PAM@RBCs上的SA PAM极少发生解吸附,而在高剪切应力（100 dynes/cm2）的刺激下,SA PAM的解吸附比较彻底,只有很少的SA PAM仍然吸附在红细胞上,表明SA PAM具有较好的剪切应力刺激下的解吸附能力。兔子的Fe Cl3模型和Apo E-/-小鼠模型均显示,SA PAM@RBCs具有比游离SA更好的治疗效果,并且在体内具有极好的安全性。上述结果表明,具有ROS和剪切应力双重敏感的仿生给药系统能为动脉粥样硬化的治疗提供一种比较有前景的策略。（3）开发了可以同时响应动脉粥样硬化斑块处ROS和剪切应力微环境的智能响应系统（SV MC@RBCs）,该系统由RBCs和聚甲基丙烯酸缩水甘油酯-聚硫化丙烯（PGED-PPS）装载辛伐他汀（SV）形成的阳离子胶束（SV MC）组成。该载药系统同SA PEI@RBCs和SA PAM@RBCs相比,作为载体的PGED-PPS还具有降低ROS的作用,可以与辛伐他汀起到协同治疗动脉粥样硬化的作用。体外和体内实验结果表明,SV MC@RBCs可以有效治疗动脉粥样硬化,不仅避免了出血的风险,而且具有出色的体内安全性。这些结果表明,SV MC@RBCs是有望用于治疗ROS相关疾病的治疗性纳米药物。
马岱朝[3]（2021）在《丹参多酚酸通过小胶质细胞P2X7/NLRP3/GSDMD通路减轻实验性脑缺血再灌注损伤研究》文中指出目的:大量研究表明丹参多酚酸可以改善缺血性脑卒中的预后结局,并通过多种药理作用及机制发挥神经保护作用,但其潜在的作用机制有待进一步阐明。小胶质细胞参与脑梗死后的炎症反应,而小胶质细胞中由NLRP3炎症小体及其上游的P2X7受体和下游的GSDMD分子构成的P2X7/NLRP3/GSDMD通路介导脑梗死后的炎症级联反应。本研究建立大鼠大脑中动脉闭塞/再通（MCAO/R）模型和大鼠原代神经元与原代小胶质细胞共培养缺氧缺糖/复氧复糖（OGD/R）模型,通过观察丹参多酚酸的注射剂型注射用丹参多酚酸盐（SAFI）对MCAO/R模型神经功能评分、梗死体积、神经元凋亡、炎症因子表达及OGD/R模型中神经元细胞活力与凋亡的影响,并且观察SAFI对MCAO/R模型脑皮质及OGD/R模型中小胶质细胞中P2X7/NLRP3/GSDMD通路中相关分子的表达的影响,旨在探讨SAFI通过抑制小胶质细胞P2X7/NLRP3/GSDMD通路对实验性脑缺血再灌注（I/R）损伤的神经保护作用及分子机制。材料与方法:1.SAFI对MCAO/R模型大鼠神经保护作用（1）将58只SD大鼠随机分为2部分,第一部分大鼠随机分2组:I/R组（MCAO/R+生理盐水）,I/R+SAFI组（MCAO/R+SAFI）,于术后第1至第7天每天进行一次神经功能评分,于术后第7天获取脑组织测量梗死体积。实验第二部分动物随机分为四组:Control组（假手术+生理盐水）,SAFI组（假手术+SAFI）,I/R组（MCAO/R+生理盐水）,I/R+SAFI组（MCAO/R+SAFI）,该部分大鼠3天后取脑用于组织学（HE、免疫组化、TUNEL、荧光染色）检测及RT-PCR及western blot检测。（2）使用尼龙线由颈外动脉插入至大脑中动脉（MCA）阻断MCA血供引起供血区域缺血损伤,封堵120分钟后拔出尼龙线恢复血流,建立MCAO/R模型。通过观察MCAO/R模型大鼠梗死体积、神经功能评分、HE染色组织病理,免疫组织化学检测炎症因子表达、TUNEL检测神经细胞凋亡情况,评估SAFI对大鼠缺血再灌注损伤的神经保护作用。2.SAFI对经OGD/R处理的神经元细胞活力与凋亡影响的研究（1）取新生SD乳鼠分离提取原代神经元细胞及原代小胶质细胞,免疫荧光检测神经元标记物MAP2的表达鉴定神经元,免疫荧光检测小胶质细胞标记物CD11-b的表达鉴定小胶质细胞。MTT法检测不同浓度SAFI对OGD处理的大鼠原代神经元细胞和原代小胶质细胞的细胞活性筛选SAFI最佳药物浓度。（2）根据细胞类型,分为单纯神经元培养组与小胶质细胞+神经元共培养组。单纯神经元培养组分为三个亚组:Neuron组（神经元正常条件下培养）,Neuron+OGD/R组（神经元行OGD/R处理）,Neuron+OGD/R+SAFI组(神经元行OGD/R及SAFI处理。处理方法:在Neuron+OGD/R+SAFI组,将原代神经元接种于培养板中,给予SAFI预处理24 h,将培养换至无葡萄糖的DMEM于95%N2+5%CO2环境中（培养液含同浓度SAFI）培养3h,接着将细胞于正常培养条件下继续培养24h后收集细胞用于检测;Neuron+OGD/R组不加SAFI,培养条件同前;Neuron组不加SAFI于正常培养条件下培养。小胶质细胞+神经元共培养组分为三个亚组:Neuron+Microglia组（神经元与小胶质细胞正常条件下共培养）,Neuron+Microglia+OGD/R组（神经元与小胶质细胞共培养并行OGD/R处理）,Neuron+Microglia+OGD/R+SAFI组（神经元与小胶质细胞共培养并行OGD/R及SAFI处理）。处理方法:在Neuron+Microglia+OGD/R+SAFI组,将原代小胶质细胞和原代神经元细胞利用Transwell共培养体系培养。神经元细胞接种于下室,小胶质细胞接种于上室,用SAFI于正常培养条件下预处理24 h后,将细胞换至无葡萄糖的DMEM（含相同浓度的SAFI）于95%N2及5%CO2环境中,37℃培养3 h构建OGD模型,于正常培养条件下继续培养24 h后,收集神经元细胞及培养基用于检测;Neuron+Microglia+OGD/R组不加SAFI,培养条件同前;Neuron+Microglia组不加SAFI于正常培养条件下培养。（3）经OGD/R处理细胞,通过检测培养基中LDH水平反映细胞受损程度,通过CCK-8法检测各组神经元细胞的活力,采用流式细胞术检测神经元细胞的凋亡等方法,来观察SAFI对单纯培养及与小胶质细胞共培养的神经元的保护作用。3.SAFI对MCAO/R模型及OGD/R模型小胶质细胞NLRP3炎症小体激活与焦亡相关蛋白GSDMD影响的研究（1）动物造模及分组同上。将共培养细胞分为4组:分别为Control组（神经元与小胶质细胞正常条件下共培养）,SAFI组（神经元与小胶质细胞正常条件下共培养并加入SAFI）,OGD/R组（神经元与小胶质细胞共培养并行OGD/R处理）,OGD/R+SAFI组（神经元与小胶质细胞共培养并行OGD/R处理且加入SAFI干预）。（2）将体外培养的原代小胶质细胞和体外培养的大鼠原代神经元细胞利用Transwell共培养体系培养,神经元细胞种于下室,小胶质细胞接种于上室,用50ug/ml浓度的SAFI于正常培养条件下预处理24 h,后将细胞换至无葡萄糖的DMEM（含相同浓度的SAFI）于95%N2+5%CO2环境中,37℃培养3 h构建OGD模型,于正常培养条件下继续培养24 h后收集神小胶质细胞。OGD/R组不加SAFI,培养条件同前。SAFI组加SAFI于正常培养条件下培养。Control组不加SAFI于正常培养条件下培养。（3）构建MCAO/R模型及小胶质细胞OGD/R模型后,采用免疫荧光法观察皮质小胶质细胞NLRP3的表达情况,采用western blot法检测脑组织中及培养的小胶质细胞中NLRP3炎症小体激活与焦亡相关蛋白GSDMD表达及裂解的水平,采用RT-PCR检测脑组织中及培养的小胶质细胞中NLRP3炎症小体相关的m RNA表达和GSDMD的m RNA表达水平。（4）采用尼日利亚菌素和尿酸单钠作NLRP3炎症小体激活剂,在培养小胶质细胞后加入脂多糖激惹细胞,用PBS洗脱脂多糖后以SAFI处理细胞,然后以尼日利亚菌素或尿酸单钠在无血清培养基中处理细胞,然后裂解细胞后进行western blot检测。4.SAFI对MCAO/R模型及OGD/R模型NLRP3炎症小体激活上游的膜离子通道P2X7表达的影响及SAFI组分与P2X7的分子对接（1）MCAO/R造模及OGD/R模型制备及分组同上。（2）采用RT-PCR、Western blot及免疫荧光方法,观察SAFI对大鼠MCAO/R脑皮质及OGD/R模型中与神经元共培养的小胶质细胞中P2X7表达的影响。（3）采用计算机分子对接方法,从RCSB数据库下载大鼠P2X7的X-ray晶体三维结构文件,通过文献报道获取该蛋白与ATP通过氢键与离子相互作用结合口袋的主要氨基酸残基,运用Discovery Studio4.2软件对蛋白质删除配体处理,利用Auto Dock 4.2.6软件进行加氢、计算电荷、转化格式等处理。从TCMSP数据库、ZINC数据库、Pub Chem数据库获取SAFI主要成分的分子结构。利用Auto Dock软件进行半柔性对接。采用Discovery Studio4.2软件对对接结果进行可视化分析,观察SAFI的主要成分丹酚酸B、丹酚酸D、丹酚酸Y、紫草酸及迷迭香酸与P2X7结合的能力。结果:1.SAFI可改善大鼠脑MCAO/R模型神经功能缺损并减小脑梗死体积,并可减轻MCAO/R模型脑组织病理损伤。2.SAFI可减少大鼠脑MCAO/R模型脑皮质炎症因子ICAM-1、IL-1β、IL-18、TNF-α的表达水平,并减少MCAO/R模型皮质神经细胞凋亡。3.SAFI对OGD/R处理的单纯培养及与小胶质细胞共培养神经元的细胞损伤有减轻作用,并可改善细胞活力,且能降低凋亡率。4.在共培养条件下经OGD/R处理,小胶质细胞对神经元有细胞毒性作用,而SAFI可能具有减轻小胶质细胞对神经元的细胞毒性的作用。5.SAFI可以降低大鼠脑I/R损伤后小胶质细胞中NLRP3表达,并可抑制脑I/R损伤后IL-1β及IL-18等促炎性因子的表达。6.SAFI可抑制脑I/R损伤后皮质及与神经元共培养并经OGD/R处理的小胶质细胞中NLRP3炎症小体的激活。7.SAFI可以抑制脑I/R损伤后脑皮质及与神经元共培养并经OGD/R处理的小胶质细胞的焦亡相关蛋白GSDMD的裂解。8.SAFI可以降低脑I/R损伤后皮质及OGD/R处理后的小胶质细胞中NLRP3、ASC、caspase1、IL-1βm RNA的表达水平。9.SAFI可降低MCAO/R模型大鼠脑皮质Iba1及P2X7双标阳性的小胶质细胞的数量,并可降低MCAO/R模型大鼠脑皮质及与神经元共培养并经OGD/R处理的小胶质细胞中P2X7蛋白及m RNA表达。10.SAFI中的丹酚酸D、丹酚酸Y、紫草酸等活性成分可能与P2X7受体具有较好的结合能力。结论:1.抑制炎症反应及减轻神经元凋亡是SAFI治疗缺血性脑卒中发挥神经保护作用的部分药理学基础,抑制炎症反应可能是体现SAFI活血化瘀功效的一个方面。2.SAFI对OGD/R处理的神经元具有直接的和可能通过拮抗小胶质细胞对神经细胞毒性而产生间接的神经保护作用。3.SAFI中的丹酚酸D、丹酚酸Y、紫草酸等活性成分可能有拮抗P2X7受体激活的作用。4.SFAI对脑缺血再灌注损伤具有神经保护作用,部分原因可能是SAFI可抑制小胶质细胞NLRP3炎症小体激活及细胞焦亡。5.SAFI可能通过小胶质细胞P2X7/NLRP3/GSDMD通路抑制NLRP3炎症的激活及细胞焦亡,缓解下游炎症级联瀑布扩大,从而对实验性脑缺血再灌注损伤发挥神经保护作用。
周芳[4]（2021）在《基于差异表达的LncRNA TUG1研究小陷胸加味汤治疗冠心病（痰热互结证）的作用机制》文中研究说明目的:冠状动脉粥样硬化性心脏病（Coronary Atherosclerotic Heart Disease,CHD）是由冠状动脉血管发生动脉粥样硬化病变而引起血管腔狭窄或阻塞,造成心肌缺血、缺氧或坏死而导致的心脏病。一项由国家心血管病中心组织编撰体现我国心血管疾病流行与防治的报告—《中国心血管病报告2018》中分析指出:目前我国约有3亿口人被确诊罹患心血管疾病,其中冠状动脉粥样硬化性心脏病患者人数超过1100万,位列心血管疾病第二,并且死亡率在心血管疾病中位列第一,这给社会和家庭带来了很大的负担。因此,安全有效的防治工作对降低冠心病的病亡率具有重要意义。血管内皮细胞功能障碍在冠心病的发生、发展过程中具有举足轻重的作用,其贯穿冠状动脉粥样硬化的始动、发展及临床事件整个过程。中医作为中华民族的瑰宝,历经时间的沉淀和反复验证,在保护血管内皮、改善血管内皮功能方面治疗冠心病具有独特优势。近年来,随着高通量基因测序技术、基因转录组学的不断革新进步,非编码RNA（noncoding RNA,nc RNA）在各种疑难疾病中揭开神秘面纱,有关其在心血管疾病中研究不在少数,这为心血管疾病的防治提供重要思路,也为疾病的基因治疗夯实基础。牛磺酸上调基因1（Taurine up-regulated1,TUG1）首先是在体外培养的新生小鼠视网膜细胞中被发现,后来被证实在损伤血管内皮细胞中高表达,可以通过介导血管内皮细胞的损伤参与心血管疾病的发病。p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinases,p38MAPK）信号通路的激活在内皮细胞损伤中发挥重要作用,可以通过磷酸化转录因子引起多种相关基因转录,调控活性物质的表达,参与血管内皮细胞氧化应激损伤、凋亡等过程。基于差异表达的LncRNA TUG1与p38MAPK信号通路在冠心病血管内皮损伤中的重要作用,本研究将以保护血管内皮细胞作为切入点深入探讨小陷胸加味汤治疗冠心病作用机制,旨在为小陷胸加味汤的临床应用提供科学依据。方法:1.通过理论研究探索冠心病中医病名、病因病机、中医治疗的历史渊源及进展,揭示小陷胸汤治疗冠心病（痰热互结证）的中医辨证思路。基于中医药改善血管内皮功能治疗冠心病的独特优势,从基因层面及分子生物学层面挖掘小陷胸汤治疗冠心病（痰热互结证）可能潜在的作用机制,为下一步我们临床应用小陷胸加味汤治疗冠心病（痰热互结证）研究夯实理论基础。2.小陷胸加味汤治疗冠心病（痰热互结证）的临床观察及血管内皮功能的影响。选取56例冠心病（痰热互结证）患者,随机分为小陷胸加味汤组和对照组,小陷胸加味汤组在对照组西医常规治疗基础上予以小陷胸加味汤,疗程均为30天,分别观察（1）临床指标:中医临床症状,心绞痛发作次数、持续时间及发作程度;（2）实验室指标:心电图检查记录心绞痛发作时S-T段及T波的变化;血管内皮相关指标一氧化氮（NO）和内皮素（ET）分泌水平;（3）药物不良反应评价指标:血常规、尿常规、肝肾功能等。3.冠心病（痰热互结证）患者外周血LncRNA TUG1与血管内皮损伤相关性研究。随机选取15例冠心病（痰热互结证）患者,另设健康对照组15例。所有入选对象取血6ml,Real-Time PCR法检测外周血单个核细胞中LncRNA TUG1,免疫学方法测定循环内皮细胞计数,硝酸还原酶法测定一氧化氮分泌水平,放射免疫法测定内皮素分泌水平。采用Pearson相关分析,分别将LncRNA TUG1与循环内皮细胞计数、一氧化氮、内皮素做相关分析。4.基于中药血清药理学研究及时效关系研究,探索小陷胸汤加味汤调控差异表达的LncRNA TUG1与p38MAPK信号通路保护血管内皮细胞的作用机制。选用SPF级SD大鼠经灌胃给药制备小陷胸加味汤含药血清及空白对照血清;TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）制备内皮损伤模型,MTT法筛选最佳含药血清浓度及作用时间。实验分为模型组、空白血清组、小陷胸加味汤含药血清组,分别应用运用培养基、空白组血清及最佳小陷胸加味汤含药血清进行干预。采用RT-PCR法检测小陷胸加味汤含药血清对TNF-α诱导的损伤HUVEC中LncRNA TUG1的表达;Western Blot检测TNF-α诱导的损伤HUVEC中p38MAPK信号通路相关蛋白p38、P-p38的表达水平。采用Pearson相关分析来分析差异表达的LncRNA TUG1与内皮细胞p38MAPK信号通路相关蛋白p38、P-p38之间的相关性。结果:1.小陷胸汤源于《伤寒论》,后世医家在遵循原文的基础上不断扩义,明确提出在审明痰热互结病机的条件下,小陷胸汤能从多靶标、多途径、多层次改善血管内皮治疗冠心病。2.小陷胸加味汤治疗冠心病（痰热互结证）的临床疗效及对血管内皮功能的影响。小陷胸加味汤组能明显改善心绞痛症状和中医证候,与对照组比较差异具有统计学意义（P<0.05）,总有效率分别为92.86%和96.43%,心电图疗效总有效率为92.86%,优于对照组（P>0.05）。治疗后,两组NO分泌水平上调（P<0.05）,ET分泌水平降低（P<0.05）。两组治疗前后血常规、尿常规、肝肾功能等均无临床意义,小陷胸加味汤组出现1例胃痛（3.57%）,2例腹胀（7.14%）。对照组出现2例头昏、头痛（7.14%）,2例腹胀（7.14%）。3.冠心病（痰热互结证）患者外周血LncRNA TUG1与血管内皮损伤相关性研究。冠心病（痰热互结证）患者外周血中LncRNA TUG1相对表达量增加;血管内皮损伤相关指标循环内皮细胞、ET的分泌水平、NO的分泌水平与健康对照组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）,分别为循环内皮细胞计数增加,ET分泌增加,NO分泌降低。Pearson相关分析显示:冠心病（痰热互结证）患者外周血中LncRNA TUG1与循环内皮细胞计数呈显着正相关（r=0.56,P=0.03）,与NO的分泌（r=-0.58,P=0.02）呈显着负相关,同时与ET的分泌水平呈显着正相关（r=0.62,P=0.01）。4.小陷胸加味汤调控差异表达的lnc RNA TUG1与p38MAPK信号通路保护血管内皮细胞的作用机制。时效关系研究发现小陷胸加味汤含药血清以一定的时间-剂量依赖方式改善TNF-α诱导损伤HUVEC细胞的增值能力。最终选用20%小陷胸加味汤含药血清干预TNF-α诱导损伤HUVEC细胞24小时。Real-Time PCR结果显示,LncRNA TUG1的相对表达水平在模型组的平均值为1.00,在空白血清组中的平均值为0.98,在20%小陷胸加味汤含药血清组中的平均值为0.96,小陷胸加味汤含药血清组与模型组、空白血清组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。Western Blot结果显示,20%小陷胸加味汤含药血清组中p38、P-p38蛋白表达量明显下调,与模型组、空白血清组比较差异均具有显着统计学意义（P<0.05）。Pearson相关分析显示LncRNA TUG1的相对表达量与p38、P-p38蛋白的表达呈显着正相关,分别为（r=0.997,P=0.048）,（r=0.990,P=0.017）。结论:1.小陷胸加味汤联合西医常规治疗能有效改善冠心病（痰热互结证）临床症状和血管内皮功能。2.冠心病（痰热互结证）患者外周血LncRNA TUG1表达具有差异性,差异表达的LncRNA TUG1与血管内皮损伤存在一定相关性。3.小陷胸加味汤含药血清能够通过调控差异表达的LncRNA TUG1进而减少p38MAPK信号通路相关蛋白的表达,减轻内皮细胞损伤。4.在审明病机的前提下,小陷胸加味汤可以从基因层面、分子生物学层面改善血管内皮功能治疗冠心病（痰热互结证）。
庞雪[5]（2020）在《消栓通脉汤介导microRNA-181b调控NF-κB信号通路干预深静脉血栓形成的机制研究》文中研究说明目的:基于NF-κB信号通路探讨中药消栓通脉汤干预深静脉血栓形成模型大鼠的作用效果,观察中药消栓通脉汤对深静脉血栓形成模型大鼠血管内皮中microRNA-181b的干预作用,探讨microRNA-181b对深静脉血栓形成的影响及其可能机制。方法:1.采用下腔静脉狭窄法构建深静脉血栓形成大鼠模型,设假手术组,以中药消栓通脉汤组为治疗组,以生理盐水组、复方丹参片组、模型对照组为对照组,采用免疫组化及实时定量PCR技术检测模型大鼠下腔静脉内皮中NF-κB、VCAM-1、E-selectin、ICAM-1、microRNA-181b的表达变化。2.构建microRNA-181b抑制和过表达模型大鼠,并设空白组和模型对照组,采用下腔静脉狭窄法构建深静脉血栓形成大鼠模型,观察大鼠血栓形成情况,采用实时定量PCR方法检测下腔静脉静脉内皮microRNA-181b表达情况,检测NF-κB（P65）表达情况,检测VCAM-1、E-selectin、ICAM-1等黏附分子的表达变化情况。结果:1.实验研究显示,深静脉血栓形成模型大鼠血管内皮细胞中NF-κB以及VCAM-1、E-selectin、ICAM-1等黏附分子的表达较假手术组明显增强,消栓通脉汤能降低NF-κB以及VCAM-1、E-selectin、ICAM-1等黏附分子在血管内皮细胞中的表达水平,且效果明显优于复方丹参片组。2.microRNA-181b在深静脉血栓形成模型大鼠静脉内皮中的表达降低,消栓通脉汤和复方丹参片可上调深静脉血栓形成模型大鼠静脉内皮microRNA-181b的表达,且消栓通脉汤的效果明显优于复方丹参片。3.过表达microRNA-181b可以在一定程度上抑制深静脉血栓的形成,microRNA-181b对大鼠腔静脉深静脉血栓形成模型中NF-κB（P65）的表达有抑制作用,提示microRNA-181b可能对NF-κB信号通路有一定的抑制作用。结论:NF-κB信号通路在深静脉血栓形成的发生、发展过程中起重要作用,可以介导黏附分子与静脉内皮细胞的相互作用,诱导静脉内皮损伤;microRNA-181b可抑制NF-κB信号通路的激活干预静脉血栓形成;中药消栓通脉汤可以通过上调microRNA-181b的表达抑制NF-κB信号通路干预静脉血栓形成。
李达[6]（2020）在《TNF-α在深静脉血栓形成中的作用及其机制研究》文中提出深静脉血栓形成（DVT）是血管外科一类常见疾病,好发于下肢,静脉血栓一旦脱落可导致肺动脉栓塞（PE）,具有潜在的致死风险。下肢深静脉血栓形成的发病原因复杂,针对其致病机制的研究始终是血管外科研究领域中的热点,越来越多的研究证据显示炎症反应可能是深静脉血栓形成的重要病因,但是有关炎症相关因子在下肢深静脉血栓形成发病过程中的作用机制尚未被全面阐释。肿瘤坏死因子α（TNF-α）作为一种重要的炎症因子,具有调节血管渗透性,刺激促凝因子释放和诱导高凝状态形成等一系列生理功能,既往研究已显示TNF-α可能参与动脉血栓形成过程,但是动脉与静脉血栓形成在机制方面存在差异。截止目前,针对TNF-α是否参与静脉血栓形成过程的研究极少。本研究结合多种实验方法,探讨TNF-α以及TNF-α基因在深静脉血栓形成过程中的作用以及可能的作用机制。研究首先检测TNF-α在DVT患者与健康对照人群中的表达情况;通过分离并培养外周血单个核细胞（PBMCs）,观察TNF-αm RNA的表达情况以及组织因子（TF）、纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）、血管内皮细胞粘附分子-1（VCAM-1）以及细胞间粘附分子-1（ICAM-1）的表达;在深静脉血栓组PBMCs中加入TNF-α抑制剂后再观察以上几种因子的变化情况,探索TNF-α与TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1的表达之间关联性。在第二部分研究中,采用PCR-LDR方法检测TNF-α基因rs1800629（-308G/A）位点的多态性情况,并结合荟萃分析方法,探索该位点多态性与静脉血栓易感性之间的关联。在第三部研究中,通过制作小鼠深静脉血栓形成模型,分组实验观察TNF-α是否具有促进静脉血栓形成的作用,探索TNF-α影响静脉血栓形成的可能作用机制以及具体受体通路和信号通路机制;并验证具有炎症抑制作用的ATL（15-epi-lipoxin A4）是否能够减轻静脉血栓形成过程中的炎症反应,以及是否具有抑制TNF-α诱导产生的促血栓作用以及可能的作用机制。研究的第一部分结果显示在深静脉血栓患者中TNF-α的表达显着增高,血栓患者PBMCs中TNF-αmRNA高表达,在深静脉血栓发病过程中,可能存在TNF-α相关基因的激活。TNF-α的高表达与TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1的高表达相关,加入TNF-α抑制剂可以降低这些因子的表达。研究的第二部分结果显示TNF-α基因rs1800629位点多态性与下肢深静脉血栓易感性之间无明显相关性。研究的第三部分结果显示TNF-α对于静脉血栓形成具有促进作用。TNF-α的促血栓作用可能是通过TNFR2受体介导的PI3K/AKT/NF-κB信号通路激活并引起TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1等多种促凝因子、纤溶抑制因子以及粘附因子的表达升高实现。ATL能够抑制静脉血栓发生过程中的炎症反应,降低TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1等因子的表达,也显示出对于TNF-α诱导的促血栓生成作用具有一定抑制作用。本课题研究对于TNF-α在深静脉血栓形成过程中具体作用以及相关机制进行了较为深入的探索,可能为日后深静脉血栓的诊治提供新的思路和方法。本课题研究分为三个部分,下面就各部分研究目的、方法、结果和结论进行分述。第一部分TNF-α在下肢深静脉血栓形成患者中的表达及其影响深静脉血栓形成的可能机制探讨目的:观察孤立性下肢深静脉血栓（DVT）患者TNF-α的表达情况以及在经过抗凝溶栓治疗后的TNF-α表达变化情况。通过分离并培养健康对照人群和DVT患者的外周血单个核细胞（PBMCs）,观察TNF-α的表达以及组织因子（TF）、纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）以及细胞粘附因子（ICAM-1/VCAM-1）的表达。初步探讨TNF-α在下肢深静脉血栓形成过程中的可能机制。方法:经过筛选后纳入无明显诱因的孤立性急性下肢深静脉血栓形成的患者共50例,对照组为同时期体检的健康人群50例,通过酶联免疫吸附（ELISA）方法检测两组血浆TNF-α的表达水平。深静脉血栓组患者应用依诺肝素抗凝以及尿激酶溶栓治疗,ELISA法检测经治疗一周后深静脉血栓组患者的TNF-α水平,比较治疗前后TNF-α水平变化情况。分离并培养健康对照人群以及DVT患者的外周血单个核细胞（PBMCs）,实时荧光定量PCR（RT-q PCR）检测TNF-αm RNA表达情况,Western Blot方法检测TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1的表达情况。最后再加入TNF-α抑制剂,检测TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1的表达变化情况。结果:下肢深静脉血栓形成的患者血浆中TNF-α表达水平显着升高,经过抗凝溶栓治疗后TNF-α表达水平降低。通过培养PBMCs,可检测到深静脉血栓患者TNF-αm RNA水平显着高于健康对照组,TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1表达也显着高于健康对照组。在深静脉血栓组PBMCs中加入TNF-α抑制剂后,TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1表达情况显着降低。结论:TNF-α在深静脉血栓形成患者血浆中显着高表达,经过抗凝溶栓治疗后表达水平降低。通过细胞实验证实,深静脉血栓组PBMCs中TNF-αm RNA表达升高。TNF-α与TF、PAI-1等凝血系统激活以及纤溶系统抑制因子高表达相关,同时与ICAM-1以及VCAM-1等粘附因子的高表达相关。第二部分TNF-α基因rs1800629多态性与深静脉血栓形成易感性之间的相关性研究目的:探讨TNF-α基因rs1800629（-308G>A）位点多态性与汉族人群下肢深静脉血栓形成之间的关系。并通过meta分析方法,结合本部分所得的研究数据,全面分析rs1800629位点多态性与静脉血栓易感性之间相关性。方法:收集2017年11月至2019年1月期间于连云港市第一人民医院住院治疗的孤立性急性下肢深静脉血栓形成患者50例为病例组,选取同时期于连云港市第一人民医院体检中心体检的健康人群50例为对照组。下肢深静脉血栓形成的诊断标准采用2017年第三版中国深静脉血栓诊疗指南,所有患者均经由血管彩超或者下肢静脉造影检查确诊。收集病例组及对照组入组人员基本临床资料以及外周血样本,应用PCR-LDR方法检测病例组及对照组中TNF-α基因rs1800629位点多态性情况,分析rs1800629多态性与下肢深静脉血栓形成之间的关联性。随后通过系统化检索pubmed、embase、web of science、中国知网以及万方数据库,收集既往有关TNF-α基因rs1800629位点多态性与静脉血栓栓塞症关联性的研究文献,提取研究数据后,整合我们所得出的rs1800629多态性与静脉血栓易感性之间关联性的数据,采用Revman5.3软件进行荟萃分析。结果:病例组中TNF-α基因rs1800629位点的各基因型分布频率分别为GG型42例（84%）,GA型6例（12%）以及AA型2例（4%）,对照组中各基因型分布频率分别为GG型44例型（88%）,GA型5例（10%）以及AA型1例（2%）,对照组人群符合Hardy-Weinberg平衡,病例组及对照组之间基因型分布无显着统计学差异。按照等位模型（G vs.A）、杂合模型（GA vs.GG）、纯合模型（AA vs.GG）、显性模型（GA+AA vs.GG）以及隐性模型（AA vs.GG+GA）五种基因对比模型进行统计分析后,也未发现TNF-α基因rs1800629位点多态性与下肢深静脉血栓易感性之间存在显着相关性。在荟萃分析部分中,通过系统化检索相关数据库并结合本研究所得的相关研究数据,共纳入5项相关研究,所纳入荟萃分析的病例组总样本量1396例,对照组总样本量1311例,通过软件计算后,五种基因对比模型统计结果如下:等位模型（OR:1.05 95%CI 0.91-1.23 p=0.49）、显性模型（OR:1.06 95%CI 0.89-1.25 p=0.52）、杂合模型（OR:1.05 95%CI 0.88-1.25 p=0.59）、纯合模型（OR:1.14 95%CI 0.66-1.97p=0.65）以及隐性模型（OR:1.14 95%CI 0.66-1.96 p=0.65）,所有基因对比模型均未发现差异具有统计学意义。在所有的基因对比模型中均未见显着异质性（I2<50%）。按照不同族群进行的亚组分析结果也未发现具有统计学差异的基因对比模型。结论:TNF-α基因rs1800629位点多态性与下肢深静脉血栓形成易感性之间无明显相关性。第三部分TNF-α在小鼠深静脉血栓模型中的作用影响及机制研究目的:建立小鼠深静脉血栓形成模型,观察TNF-α是否具有促进静脉血栓形成的作用,并探索可能的作用机制。研究TNF-α对静脉血栓影响的具体受体通路及信号通路机制。通过进一步实验验证ATL（15-epi-lipoxin A4）是否能够抑制静脉血栓形成过程中的炎症反应,以及是否具有抑制TNF-α诱导的促血栓生成作用,并研究ATL产生影响的可能信号通路机制。方法:1、通过游离结扎小鼠下腔静脉建立小鼠深静脉血栓形成模型,确认小鼠血栓模型建立成功;分别给与血栓模型小鼠静脉注射PBS或者溶有TNF-α的PBS,分别观察建模手术后不同的时间点（6h、12h、24h、48h）TNF-α对小鼠静脉血栓形成的影响情况,通过对血栓长度及重量的测量,确定血栓差异最大的时间点。2、将小鼠随机分为4组,分别为:○1对照组（Control组）○2假手术组（Sham组）○3 DVT手术组（术前10min尾静脉注射PBS再进行血栓建模）○4 TNF-α+手术组（术前10min尾静脉注射溶解有0.4μg/kg TNF-α的PBS再进行血栓建模）,在血栓形成差异最大的时间点,处死小鼠并对各组小鼠血栓形成情况进行测量;ELISA法检测血栓组小鼠及对照组和假手术组小鼠TNF-α水平;流式细胞方法检测血小板表面活化标记CD61和CD49β的表达,通过血小板聚集实验检测各组小鼠血小板聚集情况;Western Blot方法测量各组小鼠下腔静脉血管组织中TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1的表达情况。3、通过TNFR1-/-以及TNFR2-/-小鼠进行血栓建模（术前10min尾静脉注射0.4μg/kg溶有TNF-α的PBS再进行血栓建模）,对TNFR1-/-以及TNFR2-/-小鼠静脉血栓形成情况进行测量;测量各组小鼠下腔静脉血管组织中TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1的表达情况;对比TNFR1-/-以及TNFR2-/-小鼠与野生型TNF-α+手术组小鼠之间是否存在血栓形成的差别以及各种因子表达的差别。4、再取小鼠分为两组,一组为ATL+DVT手术组（术前1h尾静脉注射溶解有100μg/kg 15-epi-lipoxin A4的PBS再进行血栓建模）,另外一组为ALT+TNF-α+手术组（术前1h尾静脉注射溶解有100μg/kg15-epi-lipoxin A4的PBS,术前10min尾静脉注射溶解有0.4μg/kg TNF-α的PBS再进行血栓建模）,测量各组小鼠下腔静脉血管组织中TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1的表达情况;采用HE染色以及免疫组化的方法分析血栓组织中炎症细胞表达情况以及各组小鼠下腔静脉血管组织中TF、PAI-1以及ICAM-1表达情况;RT-q PCR方法检测TNF-α以及ATL对于小鼠下腔静脉血管组织中PI3K、AKT1以及NF-κB m RNA表达的影响;Western Blot方法检测各组小鼠下腔静脉内皮组织中p-PI3K、PI3K、pAKT1、AKT1以及NF-κB表达情况。结果:1、DVT手术组小鼠血浆TNF-α水平显着升高,通过分组研究发现TNF-α对于静脉血栓形成具有促进作用,术后24小时TNF-α对血栓形成效果影响最大。与对照组、假手术组以及DVT手术组相比,TNF-α+手术组小鼠血栓长度和重量都增高,差异具有统计学意义。2、TNF-α+手术组小鼠与DVT手术组小鼠在血小板聚集实验中无显着性差异,流式细胞检测方法也显示在两组小鼠血浆中活化的血小板无显着差异。3、与对照组、假手术组以及DVT手术组相比,TNF-α+手术组小鼠下腔静脉血管组织中TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1等因子的表达均升高。4、对比野生型TNF-α+手术组,TNFR1-/-小鼠中血栓形成长度和重量没有显着差异;TNFR2-/-小鼠在血栓形成长度和重量方面降低,下腔静脉血管组织中TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1等因子表达情况减少,差异具有统计学意义。5、HE染色结果显示TNF-α+手术组血栓组织中炎症细胞浸润水平显着高于手术组,而ATL+手术组小鼠血栓组织中炎症细胞浸润水平显着低于DVT手术组。免疫组化以及Western Blot方法检测结果显示ATL+手术组小鼠TF、PAI-1、ICAM-1以及ICAM-1的表达相较DVT手术组小鼠受到抑制,ATL+TNF-α+手术组小鼠TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1的表达相较TNF-α+手术组小鼠显着降低。6、RT-q PCR检测结果以及Western Blot方法检测结果显示TNF-α+手术组小鼠下腔静脉血管组织中PI3K、ATK1以及NF-κB m RNA表达显着高于DVT手术组,相关蛋白的表达也显着增高,差异具有统计学意义。而ATL则能够抑制PI3K、ATK1以及NF-κB的表达。结论:在小鼠深静脉血栓模型中,TNF-α表达水平升高。TNF-α对于静脉血栓形成具有促进作用。TNF-α在小鼠体内没有显示出影响血小板聚集及活化的作用。其促血栓形成作用可能主要通过TNFR2受体介导的PI3K/AKT/NF-κB信号通路激活并引起TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1等因子表达升高实现。ATL能够抑制静脉血栓发生过程中的炎症反应以及TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1等因子的表达,也显示出对于TNF-α诱导的促血栓生成作用具有一定抑制作用。ATL所产生的抑制作用可能是通过抑制PI3K/AKT/NF-κB信号通路进而下调由TNF-α介导的一系列促凝因子以及粘附因子的表达来实现。
肖凡[7]（2019）在《OS模式VEC损伤、PMN与VEC交互作用及干预的研究》文中提出研究目的:阻塞性睡眠呼吸暂停（OSA）和慢性阻塞性肺疾病（COPD）是最常见的两种慢性呼吸系统性疾病,两病共存称为呼吸重叠综合征（OS）。由于OSA和COPD两种疾病均可引起体内氧化及抗氧化失衡和白细胞的激活以及功能紊乱,所以容易诱发全身系统性的炎症反应,增高体内炎症因子水平,促进重叠综合征病情进展和加重。从病理生理过程来看,OSA与COPD患者均会出现低氧血症。OSA和COPD两类患者的缺氧特征分别表现为夜间睡眠期间的间歇性缺氧与持续慢性缺氧。因缺氧导致的全身炎症反应,致使与之有关的炎症因子呈级联放大瀑布式反应,从而引起相关并发症,比如肺动脉高压、动脉粥样硬化、心血管疾病等。COPD和OSA都是心血管疾病的独立危险因素,可见在OSA与COPD两病共存的情况下,其有更高的心血管疾病合并症风险,死亡率更高,预后更差。目前对重叠综合征及其合并症的研究主要集中于临床和流行病学方面,其它方面的研究还很少,尤其在细胞学方面的研究。本课题探索性地提出从细胞水平研究重叠（间歇伴持续）模式低氧暴露下血管内皮细胞和中性粒细胞共培养血管内皮细胞的损伤机制,血管内皮细胞和中性粒细胞交互作用机制及抗氧化剂Tempol和炎症通道的阻断剂PTDC进行干预后对血管内皮细胞的保护作用,以期为揭示重叠综合征患者并发心血管疾病的可能发病机制与可行干预措施提供必要理论和实验依据。研究内容:1、从细胞水平研究间歇伴持续低氧暴露下中性粒细胞与内皮细胞共培养对血管内皮细胞损伤机制及各机制间相关性分析。2、细胞交互作用在重叠（间歇伴持续）低氧暴露所致血管内皮细胞损伤中的重要性及细胞间黏附分子-1的作用研究。3、从细胞水平探究抗氧化剂Tempol和炎症通道的阻断剂PTDC对间歇伴持续低氧暴露所致血管内皮细胞损伤的保护作用。研究方法:第一部分:从健康志愿者抽取空腹外周静脉血,应用双层密度梯度离心法分离中性粒细胞,然后将中性粒细胞与制备好的人脐静脉内皮细胞共培养4小时,后应用呼吸仿真系统（天津医科大学总医院呼吸与危重症学科）进行不同低氧模式（N、IH、CH、OS）的分组暴露,时间分为2小时、5小时、8小时,各组分别留取中性粒细胞与血管内皮细胞共培养上清液、血管内皮细胞。共进行10次试验即n=10。通过ELISA法检测上清液的炎症因子IL-6,TNF-α及粘附分子ICAM-1。化学试剂法检测CAT活性、MDA浓度。实时荧光定量PCR技术检测内皮细胞促凋亡基因Bak和抗凋亡基因Bcl-xl mRNA表达水平。第二部分:将中性粒细胞与内皮细胞直接共培养的OS组与单纯内皮细胞培养的OS（H）组同时置于细胞培养箱内培养4小时,然后应用天津医科大学总医院呼吸科呼吸仿真系统进行间歇伴持续低氧暴露8小时,暴露后分别收集上清液和内皮细胞。检测指标（同第一部分）。第三部分:将提取的中性粒细胞与内皮细胞共培养后,一组进行常氧暴露设为N组,其余三组均进行间歇伴持续低氧暴露,不加入任何试剂的设为OS组,加入Tempol的设为（OS+T）组,加入PTDC的设为（OS+P）组,每组分别进行2小时、5小时、8小时低氧暴露。暴露后分别收集上清液和内皮细胞。检测指标（同第一部分）。研究结果:第一部分:1、上清液炎症因子、粘附分子、氧化应激各指标比较:结果显示2h、5h、8h低氧暴露各组趋势相同且具有时间依赖性:所检测各指标各组与N组比较均有统计学差异（P<0.05）;TNF-a、IL-6、ICAM-1、MDA水平OS组高于IH组、CH组,CAT活力值OS组低于IH组、CH组,组间比较差异具有统计学意义（P<0.05）。2、内皮细胞凋亡基因表达水平比较:结果显示2h、5h、8h低氧暴露各组趋势相同:各指标各组与N组比较均有统计学差异（P<0.05）;OS组Bcl-x1、Bcl-x1/BAK表达水平低于IH组、CH组,BAK表达水平高于IH组、CH组,组间比较差异具有统计学意义（P<0.05）;随着低氧暴露时间的延长,促凋亡基因及抑凋亡基因表达水平均表现出增加趋势,而Bcl-x1/BAK水平呈下降趋势,提示促凋亡基因起主要作用。3、炎症因子、氧化应激指标、凋亡基因的相关性分析:炎症因子IL-6和TNF-α与抗氧化指标CAT呈较强负相关,与氧化应激指标MDA呈较强正相关,P<0.05;炎症因子IL-6和TNF-α与凋亡基因Bcl-xl/BAK比值呈较强负相关,P<0.05;抗氧化指标CAT与凋亡基因Bcl-xl/BAK比值呈较强正相关,氧化应激指标MDA与凋亡基因Bcl-xl/BAK比值呈较强负相关,P<0.05。第二部分:1、OS（H）组与OS组各指标比较:OS（H）组IL-6、TNF-α、ICAM-1、MDA、BAKmRNA表达水平、Bcl-xl mRNA表达水平均低于OS组,组间比较差异具有统计学意义（P<0.05）,OS（H）组CAT的活力值、Bcl-xl/BAK比值均高于OS组,组间比较差异具有统计学意义（P<0.05）。2、ICAM-1与各变量相关性分析:ICAM-1与IL-6、TNF-α、MDA呈较强的正相关;与CAT、Bcl-xl/BAK呈较强的负相关,P<0.05。第三部分:1、上清液炎症因子、粘附分子及氧化应激指标比较:结果显示2h、5h、8h低氧暴露各组趋势相同:TNF-a、IL-6、ICAM-1及MDA水平OS组高于N组、OS+T组、OS+P组,组间比较差异具有统计学意义（P<0.05）;OS+T组及OS+P组高于N组,组间比较差异具有统计学意义（P<0.05）;OS+T组与OS+P组比较差异无统计学意义;且随着暴露时间的逐渐延长,TNF-a、IL-6、ICAM-1及MDA浓度有升高趋势。CAT活力值OS组低于N组、OS+T组、OS+P组,OS+T组及OS+P组低于N组,组间比较差异具有统计学意义（P<0.05）;OS+T组与OS+P组比较差异无统计学意义;但随着低氧暴露时间的延长,CAT有下降趋势。2、内皮细胞凋亡基因表达水平比较:结果显示2h、5h、8h低氧暴露各组趋势相同:OS组抑凋亡基因Bcl-x1表达水平及Bcl-x1/BAK比值低于N组、OS+T组、OS+P组,促凋亡基因BAK表达水平高于N组、OS+T组、OS+P组,组间比较差异具有统计学意义（P<0.05）;OS+T组及OS+P组抑凋亡基因Bcl-x1表达水平及Bcl-x1/BAK比值低于N组,OS+T组及OS+P组促凋亡基因BAK表达水平高于N组,组间比较差异具有统计学意义（P<0.05）;OS+T组与OS+P组比较差异无统计学意义。随着低氧暴露时间的延长,促凋亡基因及抑凋亡基因表达水平均表现出增加趋势;而Bcl-x1/BAK水平呈下降趋势。研究结论:根据本课题研究可以得出如下结论:1、中性粒细胞与血管内皮细胞共培养后间歇伴持续低氧暴露模式与常氧模式、间歇低氧模式、持续低氧模式相比炎症反应及氧化应激更剧烈、内皮细胞凋亡加速更明显,内皮损伤更严重。提示炎症反应、氧化应激、及凋亡基因共同参与了重叠低氧暴露所致血管内皮细胞受损。2、重叠低氧暴露模式所致血管内皮细胞损伤具有时间依赖性,随着作用持续时间的增加,所致血管内皮细胞的损伤也在逐渐加重。3、氧化应激、炎症、及内皮细胞凋亡基因均参与了重叠低氧模式所致血管内皮细胞损伤,三者之间两两存在强相关性。互相促进,循环往复,使血管内皮细胞损伤呈级联放大瀑布式加重。4、重叠低氧状态下中性粒细胞与血管内皮细胞的交互作用使内皮细胞损伤相关的炎症、氧化应激及内皮细胞凋亡更加剧烈。即中性粒细胞与内皮细胞间的交互作用促使重叠低氧模式暴露下所致血管内皮细胞损伤更严重,5、黏附分子ICAM-1与炎症因子、氧化/抗氧化指标及凋亡基因均存在强相关性,在内皮细胞损伤机制中起了重要作用。6、重叠低氧暴露模式所致血管内皮细胞炎症因子及黏附分子增加,氧化应激增强及内皮细胞凋亡加速均可被抗炎及抗氧化剂部分抑制。抗炎及抗氧化干预可以起到保护血管内皮细胞的作用。具有治疗重叠综合征并发心血管疾病的潜力。7、抗炎及抗氧化治疗早期应用即产生效果,提倡早干预,早治疗。可以避免产生不良后果,导致多脏器功能受损。8、抗炎及抗氧化干预仅可部分保护血管内皮细胞,仍不能完全逆转内皮细胞损伤,考虑与内皮细胞损伤机制的多分子通道途径有关。期待更进一步的研究能够通过多靶点精准治疗完全逆转内皮细胞损伤。9、低氧导致炎症与氧化应激具有强的相关性,试剂Tempol及PDTC都具有清除氧自由基ROS的抗氧化作用及抑制炎症通道NF-κB的抗炎作用,两种试剂的抗炎及抗氧化作用无明显差异。
孔一帏[8]（2019）在《抗凝血酶Ⅲ保护重症胰腺炎所致急性肾损伤的分子机制》文中研究表明背景:抗凝血酶Ⅲ（antithrombin Ⅲ,ATⅢ）是主要的凝血因子抑制剂,并且具有抗炎特性。既往研究发现ATⅢ在肾缺血再灌注损伤的动物模型中具有肾脏保护作用。然而,ATⅢ对重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）诱导的急性肾损伤（acute kidney injury,AKI）的保护作用还有待证实。本实验拟评估ATⅢ对SAP诱导的AKI的保护作用及分子机制。方法:收集自2014年7月1日至2015年12月31日期间,我院重症急性胰腺炎患者资料,包括患者基本信息（年龄、性别）,血清ATⅢ活性,相关临床指标。并检测血尿素氮和血清肌酐。评估SAP患者ATⅢ活性与AKI发病率之间的关系。取雄性Sprague-Dawley大鼠分为4组,分别为假手术+生理盐水组（Sham+vehicle）、SAP+生理盐水组（SAP+vehicle）、SAP+术前ATⅢ组（SAP+preATⅢ）、SAP+术后ATⅢ组（SAP+post-ATⅢ）。通过将牛磺胆酸钠溶液逆行输注到胆胰管中建立SAP模型。在牛磺胆酸钠输注之前或之后30分钟静脉注射抗凝血酶Ⅲ或等体积生理盐水。所有大鼠在诱导胰腺炎后18小时接受安乐死,取血液和肾脏分析化验。分别评估各组大鼠肾脏功能,肾脏组织学改变,肾脏炎症和氧化应激及肾脏细胞凋亡情况。将人类肾皮质近曲小管上皮细胞（HK-2）分为4组,分别为对照组、ATⅢ组、TNFα组、TNFα+ATⅢ组。HK-2细胞用ATⅢ或等体积生理盐水预处理6小时,然后暴露于TNFα连续12小时。评估ATⅢ的体外抗炎作用。结果:低ATⅢ活性的SAP患者有更高的AKI发生率,且与ATⅢ活性降低的程度相关。ATⅢ不减轻胰腺损伤,但显着改善肾功能损伤和肾脏组织学损伤。给予ATⅢ的SAP大鼠,血尿素氮（Blood urea nitrogen,BUN）、血清肌酐（Serum creatinine,SCr）水平显着降低。同时降低血清肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factorα,TNFα）浓度,并抑制肾脏促炎症因子单核细胞趋化因子蛋白1（Monocyte chemotactic protein 1,MCP-1）和细胞间粘附分子1（Intercellular cell adhesion molecule 1,ICAM-1）的表达。另外,ATⅢ缓解肾脏内F4/80阳性细胞和GR-1阳性细胞的浸润。再者,ATⅢ降低SAP大鼠肾脏中丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平,升高抗氧化酶超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）水平。在SAP大鼠中,ATⅢ减少凋亡蛋白Caspase-3的表达,而增加抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。此外,在人近曲小管上皮细胞中,ATⅢ抑制TNFα刺激的ICAM-1和MCP-1的上调。结论:ATⅢ可缓解SAP诱导的急性肾损伤,其机制可能与抑制炎症,氧化应激和细胞凋亡有关。本研究揭示了ATⅢ在SAP诱导的AKI中具有潜在的预防和治疗作用。
张婷[9]（2018）在《化瘀解毒法对早期老年糖尿病足患者炎性因子的影响研究》文中研究说明目的:观察活血化瘀、清热解毒中药对早期老年糖尿病足患者炎性因子的影响。方法:90例老年糖尿病足患者随机分为治疗组60例,对照组30例。治疗组（A组、B组）分为中药高剂量组联合阿司匹林30例,中药低剂量组联合阿司匹林30例,对照组（C组）给予西药阿司匹林治疗。治疗前后观察患者超敏C反应蛋白（hs-CRP）、血浆纤维蛋白原（FIB）、肿瘤坏死因子ɑ（TNF-α）、每20分钟微栓子个数各项指标。结果:治疗组治疗4周后与治疗前相比超敏C反应蛋白、血浆纤维蛋白原、肿瘤坏死因子α各炎性指标水平明显降低,每20分钟微栓子个数明显减少,统计学处理P<0.05有显着性差异,P<0.01有非常显着性差异。对照组治疗前后P>0.05,差异无显着性,但微栓子个数治疗前后比较有显着性差异。治疗组与对照组组间比较统计学处理P<0.05,有显着性差异。结论:化瘀解毒法对降低早期老年糖尿病足患者炎性因子水平及微栓子形成具有显着疗效。
张玥[10]（2007）在《炎症细胞因子对深静脉血栓形成的影响及中药干预机制的研究》文中指出目的:本研究从炎症细胞因子角度深入探索深静脉血栓形成（DVT）疾病的本质,并探讨清热化瘀中药干预DVT中炎症细胞因子的作用机制,为临床诊治提供客观依据。方法:临床研究筛选深静脉血栓形成患者60例,分别根据病程和中医证型分组,按病程分为急性期组、迁延期组、慢性期组和复发组,按证型分为湿热下注型组、血瘀湿重型组和痰瘀互结型组,观察其C反应蛋白（CRP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、白介素-8（IL-8）、白介素-10（IL-10）水平。实验研究以下腔静脉结扎法大鼠为模型,采用中药花栀通脉片治疗,穿王消炎片和复方丹参片作对照,观察各组大鼠的血清TNF-α、IL-6和IL-8的水平以及下腔静脉病理形态学改变及静脉壁中炎性细胞、TNF-α、IL-10、E-选择素（Es）和核转录因子-κB（NF-κB）P65mRNA的表达。结果:临床研究显示DVT患者的CRP、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10均升高（P<0.05,P<0.01）,其中CRP和TNF-α与血栓病情的严重程度呈密切相关,迁延期组IL-10的水平高于急性期组和慢性期组（P<0.01）,复发性DVT的患者的CRP、TNF-α、IL-6和IL-8水平比初发急性期组明显增高（P<0.05,P<0.01）;湿热下注型较血瘀湿重型和痰瘀互结型的CRP、TNF-α和IL-6增高（P<0.01）,而血瘀湿重型的IL-10显着高于湿热下注型和痰瘀互结型（P<0.01）。实验研究显示血栓模型组大鼠的下腔静脉病理形态学改变较假手术组程度重,其血清TNF-α、IL-6和IL-8的水平以及静脉壁中炎性细胞、TNF-α、IL-10、Es和NF-κBP65mRNA的表达强（P<0.05,P<0.01）,花栀通脉片能改善大鼠下腔静脉血栓形成的病理改变程度,降低血清TNF-α、IL-6和IL-8的水平（P<0.05,P<0.01）,减少静脉壁中炎性细胞、TNF-α、Es和NF-κBP65mRNA的表达（P<0.05,P<0.01）,效果优于穿王消炎组和复方丹参组。结论:炎症细胞因子参与了DVT发生与发展乃至机化消退的整个病理过程,并可作为中医临床辨证的客观指标之一,而中药可以通过干预炎症细胞因子的角度来达到治疗DVT的目的。
二、髋部和骨盆骨折患者肿瘤坏死因子-α、粘附分子-1的测定及其与静脉血栓形成的关系（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、髋部和骨盆骨折患者肿瘤坏死因子-α、粘附分子-1的测定及其与静脉血栓形成的关系（论文提纲范文）
（2）具有活性氧和剪切应力双重响应药物递送系统及用于动脉粥样硬化治疗的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 动脉粥样硬化的概述 |
| 1.2.1 动脉粥样硬化的形成与发展 |
| 1.2.2 动脉粥样硬化的致病因素 |
| 1.2.2.1 血脂 |
| 1.2.2.2 炎症 |
| 1.2.2.3 血液动力学 |
| 1.2.2.4 血压 |
| 1.2.2.5 糖尿病 |
| 1.2.2.6 吸烟 |
| 1.2.3 动脉粥样硬化的临床诊断和治疗 |
| 1.2.3.1 动脉粥样硬化的临床诊断 |
| 1.2.3.2 动脉粥样硬化的临床治疗 |
| 1.3 纳米技术在动脉粥样硬化中的应用 |
| 1.3.1 纳米药物在动脉粥样硬化治疗中的应用 |
| 1.3.1.1 pH响应型 |
| 1.3.1.2 活性氧响应型 |
| 1.3.1.3 靶向递送 |
| 1.3.1.4 光热敏感型 |
| 1.3.2 纳米探针在动脉粥样硬化诊断中的应用 |
| 1.3.2.1 近红外(NIR)荧光成像纳米探针 |
| 1.3.2.2 光声成像纳米探针 |
| 1.3.2.3 多模态成像纳米探针 |
| 1.4 活性氧敏感型纳米载体的应用 |
| 1.4.1 内源性ROS敏感药物释放 |
| 1.4.2 外源性ROS敏感药物释放 |
| 1.5 机械应力敏感型纳米载体的应用 |
| 1.5.1 内源机械应力刺激型纳米载体 |
| 1.5.2 外源机械应力刺激型纳米载体 |
| 1.6 本论文的研究思路和主要内容 |
| 第二章 具有ROS和剪切应力双重响应的SA PEI@RBCs用于动脉粥样硬化的治疗 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 实验原料 |
| 2.2.2 主要仪器 |
| 2.2.3 PEI-SH的合成 |
| 2.2.4 SA的合成 |
| 2.2.5 SA PEI的制备 |
| 2.2.6 SA PEI@RBCs的制备 |
| 2.2.7 SA PEI和 SA PEI@RBCs的表征 |
| 2.2.8 SA PEI的载药量及药物释放 |
| 2.2.9 SA PEI的血液相容性 |
| 2.2.10 SA PEI的细胞毒性 |
| 2.2.11 细胞内ROS的水平 |
| 2.2.12 NR PEI@RBCs的细胞内吞 |
| 2.2.13 体外剪切模型 |
| 2.2.14 FeCl_3诱导的兔颈动脉血栓形成模型 |
| 2.2.15 体内安全性评价 |
| 2.2.16 统计分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 SA PEI和 SA PEI@RBCs的制备与表征 |
| 2.3.2 体外药物释放 |
| 2.3.3 体外溶血分析 |
| 2.3.4 细胞毒性 |
| 2.3.5 细胞内ROS的含量 |
| 2.3.6 细胞内吞 |
| 2.3.7 体外剪切应力响应 |
| 2.3.8 体内治疗 |
| 2.3.9 体内安全性 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 具有高载药量的 ROS和剪切应力双重响应的 SA PAM@RBCs用于动脉粥样硬化的治疗 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验原料 |
| 3.2.2 主要仪器 |
| 3.2.3 4.0G PAMAM的合成 |
| 3.2.4 PAM-SH的合成 |
| 3.2.5 SA PAM的合成 |
| 3.2.6 SA PAM@RBCs的合成 |
| 3.2.7 SA PAM和 SA PAM@RBCs的表征 |
| 3.2.8 SA PAM的载药量与药物释放 |
| 3.2.9 细胞与动物 |
| 3.2.10 血液相容性 |
| 3.2.11 MTT |
| 3.2.12 细胞内ROS的检测 |
| 3.2.13 流式细胞术 |
| 3.2.14 体外细胞摄取研究 |
| 3.2.15 体外剪切模型 |
| 3.2.16 FeCl_3诱导的兔颈动脉血栓形成模型 |
| 3.2.17 ApoE~(-/-)小鼠模型 |
| 3.2.18 药代动力学 |
| 3.2.19 安全性评价 |
| 3.2.20 统计分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 辛伐他汀酸、4.0G PAMAM和 PAM-SH的表征 |
| 3.3.2 SA PAM和 SA PAM@RBCs的表征 |
| 3.3.3 体外H_2O_2敏感性药物释放曲线 |
| 3.3.4 体外溶血分析 |
| 3.3.5 体外细胞存活率 |
| 3.3.6 巨噬细胞中ROS的含量 |
| 3.3.7 巨噬细胞对SA PAM@RBCs的体外细胞摄取 |
| 3.3.8 剪切应力模型 |
| 3.3.9 药代动力学 |
| 3.3.10 FeCl_3诱导兔颈动脉血栓形成模型 |
| 3.3.11 ApoE~(-/-)小鼠体内模型 |
| 3.3.12 SA PAM@RBCs的体内安全性评价 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 具有ROS和剪切应力响应的仿生胶束药物递送系统通过消耗活性氧有效地治疗动脉粥样硬化 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 实验原料 |
| 4.2.2 主要仪器 |
| 4.2.3 PGED的合成 |
| 4.2.4 PGED-PPS的合成 |
| 4.2.5 SV MC@RBCs的合成 |
| 4.2.6 SV MC@RBCs的表征 |
| 4.2.7 体外载药量和药物释放曲线的测定 |
| 4.2.8 活性氧清除能力的测定 |
| 4.2.9 溶血试验 |
| 4.2.10 体外细胞毒性试验 |
| 4.2.11 剪切力诱导的FITC MC@RBCs的体外解吸附 |
| 4.2.12 细胞摄取 |
| 4.2.13 细胞内ROS的测量 |
| 4.2.14 流式细胞仪分析 |
| 4.2.15 动物 |
| 4.2.16 体内FeCl_3诱导的颈动脉血栓模型 |
| 4.2.17 体内药代动力学研究 |
| 4.2.18 SV MC@RBCs体内生物安全性评价 |
| 4.2.19 统计分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 SV MC@RBCs的合成与表征 |
| 4.3.2 体外药物释放曲线的测定 |
| 4.3.3 活性氧清除能力的测定 |
| 4.3.4 溶血试验 |
| 4.3.5 体外细胞毒性试验 |
| 4.3.6 体外剪切力诱导的FITC MC@RBCs解离 |
| 4.3.7 SV MC@RBCs的细胞摄取 |
| 4.3.8 细胞内ROS水平的测量 |
| 4.3.9 SV MC@RBCs的抗血栓活性 |
| 4.3.10 体内药代动力学研究 |
| 4.3.11 SV MC@RBCs的体内生物安全性评价 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（3）丹参多酚酸通过小胶质细胞P2X7/NLRP3/GSDMD通路减轻实验性脑缺血再灌注损伤研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 注射用丹参多酚酸盐(SAFI)对MCAO/R模型大鼠神经保护作用 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 SAFI对经OGD/R处理的神经元细胞活力与凋亡影响的研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文三 SAFI对MCAO/R模型及OGD/R模型小胶质细胞NLRP3炎症小体激活与GSDMD影响的研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文四 SAFI对MCAO/R模型及OGD/R模型NLRP3炎症小体激活上游的膜通道P2X7表达的影响及SAFI组分与P2X7的分子对接 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 综述一 脑梗死后的免疫反应 |
| 参考文献 |
| 综述二 注射用丹参多酚酸盐治疗脑梗死的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（4）基于差异表达的LncRNA TUG1研究小陷胸加味汤治疗冠心病（痰热互结证）的作用机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 第一章 冠心病中医病名溯源 |
| 第二章 冠心病中医发病机理 |
| 1.因虚致病 |
| 2.因实致病 |
| 3.虚实夹杂 |
| 第三章 冠心病中医治疗 |
| 1.中医辨证论治 |
| 2.中成药 |
| 3.静脉注射中药 |
| 4.中医外治法 |
| 第四章 小陷胸汤治疗冠心病的历史渊源及以小陷胸汤为基础方治疗冠心病的现代研究 |
| 1.《伤寒论》对小陷胸汤的认识 |
| 2.以小陷胸汤为基础方治疗冠心病的现代研究 |
| 第五章 现代医学对冠心病的认识 |
| 1.现代医学对冠心病的发病机制认识 |
| 2.冠心病疾病的诊断与分类 |
| 3.现代医学对冠心病的治疗 |
| 4.冠心病的预防 |
| 第六章 血管内皮功能障碍与冠心病发病的研究 |
| 1.血管内皮功能障碍参与冠状动脉粥样硬化的形成 |
| 2.血管内皮功能障碍加速冠状动脉粥样硬化的进程 |
| 3.保护血管内皮细胞,改善内皮细胞功能是防治冠心病的重要途径 |
| 第七章 血管内皮功能障碍与p38MAPK信号通路的初探 |
| 1.p38MAPK信号通路的介绍 |
| 2.p38MAPK信号通路与血管内皮功能障碍初探 |
| 第八章 LncRNA TUG1 与冠心病发病的研究 |
| 1.LncRNA TUG1 与血管内皮细胞 |
| 2.LncRNA TUG1 与血管平滑肌细胞 |
| 3.LncRNA TUG1 与免疫炎症 |
| 参考文献 |
| 第二部分 临床研究 |
| 临床研究一 小陷胸加味汤治疗冠心病(痰热互结证)的临床观察及血管内皮功能的影响 |
| 1.资料与方法 |
| 2.试验结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 临床研究二 冠心病(痰热互结证)患者外周血 LncRNA TUG1与血管内皮损伤相关性研究 |
| 1.资料与方法 |
| 2.试验结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究 |
| 1.主要仪器 |
| 2.实验动物、细胞、主要试剂、试剂盒及引物设计 |
| 实验一 含药血清制备、细胞模型建立及小陷胸加味汤含药血清浓度和干预时间选择 |
| 1.含药血清的制备 |
| 2.细胞模型制备 |
| 3.小陷胸加味汤含药血清浓度和干预时间选择 |
| 4.实验分组及干预方法 |
| 实验二 RT-PCR法检测小陷胸加味汤含药血清对TNF-α诱导损伤HUVEC中 LncRNA TUG1 的影响 |
| 1.实验方法 |
| 2.统计分析 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 实验三 Western Blot检测小陷胸加味汤含药血清对TNF-α诱导损伤HUVEC中 p38MAPK信号通路相关蛋白的影响 |
| 1.实验方法 |
| 2.统计分析 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 实验四 差异表达的LncRNA TUG1与p38MAPK信号通路相关蛋白表达相关性分析 |
| 1.统计方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 综合讨论 |
| 1.本研究以小陷胸汤为基础方加味治疗冠心病(痰热互结证)的立方依据 |
| 2.对本研究细胞模型及观察指标的讨论 |
| 3.本研究结果初探 |
| 4.本研究创新性分析 |
| 5.对本研究的总体思考与展望 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 附录 |
| 附录一 |
| 综述一 中医药改善血管内皮功能治疗冠心病的研究进展 |
| 1.中药或中药提取物 |
| 2.中药复方 |
| 3.中成药 |
| 4.结语和展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 长链非编码RNA与冠心病的研究进展 |
| 1.LncRNA的概述 |
| 2.LncRNA的生物功能 |
| 3.LncRNA在冠心病发病中的作用 |
| 4.结语和展望 |
| 参考文献 |
| 附录二 附图 |
| 附录三 博士期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（5）消栓通脉汤介导microRNA-181b调控NF-κB信号通路干预深静脉血栓形成的机制研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| abstract |
| 引言 |
| 实验研究 |
| 实验一 DVT大鼠血管内皮细胞中NF-κB、ICAM-1、E-selectin、VCAM-1 的表达和中药干预作用 |
| 一、技术路线 |
| 二、实验材料 |
| (一)实验动物 |
| (二)实验主要试剂 |
| (三)实验主要仪器 |
| (四)实验主要器械和材料 |
| (五)实验药物 |
| 三、实验方法 |
| (一)实验动物及分组 |
| (二)用药剂量及给药方式 |
| (三)模型制备 |
| (四)标本取材 |
| (五)标本石蜡切片制备 |
| (六)血管标本HE染色 |
| (七)免疫组化实验步骤 |
| (八)免疫组化染色切片结果定量分析 |
| (九)统计分析 |
| 四、实验结果 |
| (一)大鼠模型成功建立 |
| (二)各组大鼠血管内皮细胞NF-κB(P65)、VCAM-1、E-selectin、ICAM-1 的表达水平以及中药对各项指标的影响 |
| 实验二 DVT大鼠血管壁中microRNA-181b的表达和中药干预作用 |
| 一、技术路线 |
| 二、实验材料 |
| (一)实验动物 |
| (二)实验主要试剂 |
| (三)实验主要仪器 |
| (四)实验主要器械和材料 |
| (五)实验药物 |
| 三、实验方法 |
| (一)实验分组 |
| (二)用药剂量及给药方式 |
| (三)模型制备 |
| (四)标本取材 |
| (五)实验步骤 |
| (六)统计方法 |
| 四、实验结果 |
| (一)大鼠模型成功建立 |
| (二)各组大鼠静脉内皮细胞microRNA-181b表达水平变化 |
| 实验三 microRNA-181b调控NF-κB信号通路干预深静脉血栓形成 |
| 一、技术路线 |
| 二、实验材料 |
| (一)实验动物 |
| (二)动物分组 |
| (三)实验试剂 |
| (四)实验仪器 |
| (五)实验器械和材料 |
| 三、实验方法 |
| (一)动物模型建立 |
| (二)各组大鼠成栓效应检测 |
| (三)各组大鼠静脉壁NF-κB(P65)表达情况及VCAM-1、E-selectin、ICAM-1 等黏附分子的表达情况检测 |
| (四)统计学处理 |
| 四、实验结果 |
| (一)静脉给药影响静脉内皮miR-181b的表达 |
| (二)miR-181b抑制大鼠静脉血栓模型的成栓效应 |
| (三)miR-181b抑制DVT模型中静脉内皮黏附分子的表达 |
| (四)miR-181b抑制腔静脉DVT模型中NF-κB信号通路的激活 |
| 讨论 |
| 一、祖国医学对DVT认知与研究 |
| (一)祖国医学对DVT病因病机的认识 |
| (二)祖国医学对DVT的治疗 |
| 二、现代医学对DVT的认识和研究 |
| (一)现代医学对DVT发病机制的认识 |
| (二)现代医学对DVT的预防 |
| (三)现代医学对DVT的诊断 |
| (四)现代医学对DVT的治疗 |
| 三、炎性反应与DVT |
| 四、microRNA与 DVT |
| 五、消栓通脉汤方解 |
| 六、消栓通脉汤对DVT的干预机制研究 |
| (一)消栓通脉汤抑制了大鼠静脉血管内皮中NF-κB(P65)及黏附分子的表达 |
| (二)消栓通脉汤可上调miR-181b的表达治疗DVT |
| (三)miR-181b可以抑制NF-κB信号通路的激活干预DVT发病 |
| 七、本研究创新点及不足之处 |
| (一)创新点 |
| (二)不足之处 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 综述 炎性反应与静脉血栓栓塞症的相关性研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 一、附图 |
| 二、附表 |
| 致谢 |
| 查新报告 |
| 发表论文 |
| 科研课题 |
（6）TNF-α在深静脉血栓形成中的作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一部分 TNF-α在下肢深静脉血栓形成患者中的表达及其影响深静脉血栓形成的可能机制探讨 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 TNF-α基因rs1800629 多态性与汉族人群下肢深静脉血栓形成相关性研究以及TNF-α基因rs1800629 多态性与深静脉血栓形成易感性荟萃分析 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第三部分 TNF-α在小鼠深静脉血栓模型中的作用影响及机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 全文小结 |
| 研究创新与不足 |
| 一、研究创新 |
| 二、研究不足 |
| 综述 |
| 综述1:TNF-α以及TNF-α基因rs1800629 多态性与血栓性疾病关联性研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述2:炎症反应与静脉血栓栓塞症 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词表 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（7）OS模式VEC损伤、PMN与VEC交互作用及干预的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、从细胞水平研究间歇伴持续低氧暴露下中性粒细胞与内皮细胞共培养对血管内皮细胞损伤机制及各机制间相关性分析 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 中性粒细胞(PMN)的提取 |
| 1.1.2 人血管内皮细胞的准备 |
| 1.1.3 中性粒细胞与内皮细胞直接共培养 |
| 1.1.4 暴露装置 |
| 1.1.5 实验分组 |
| 1.1.6 检测指标 |
| 1.1.7 仪器设备和试剂 |
| 1.1.8 统计学方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 上清液炎症因子及粘附分子比较 |
| 1.2.2 上清液氧化应激标志物比较 |
| 1.2.3 内皮细胞凋亡基因表达水平比较 |
| 1.2.4 炎症因子与氧化应激指标的相关性分析 |
| 1.2.5 炎症因子与凋亡基因的相关性分析 |
| 1.2.6 氧化应激与凋亡基因的相关性分析 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、细胞交互作用在重叠低氧暴露下所致血管内皮细胞损伤中的重要性及细胞间黏附分子-1的作用研究 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 中性粒细胞(PMN)的提取 |
| 2.1.2 人血管内皮细胞的准备 |
| 2.1.3 细胞培养 |
| 2.1.4 暴露装置 |
| 2.1.5 实验分组 |
| 2.1.6 检测指标 |
| 2.1.7 统计学方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 OS(H)组与OS组各指标比较 |
| 2.2.2 ICAM-1 与各变量相关性分析 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、抗氧化剂Tempol和炎症通道的阻断剂PTDC对间歇伴持续低氧暴露所致血管内皮细胞损伤的保护作用 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 中性粒细胞(PMN)的提取 |
| 3.1.2 人血管内皮细胞的准备 |
| 3.1.3 中性粒细胞与内皮细胞直接共培养 |
| 3.1.4 暴露装置 |
| 3.1.5 实验分组 |
| 3.1.6 检测指标 |
| 3.1.7 统计学方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 上清液炎症因子及粘附分子比较 |
| 3.2.2 上清液氧化应激标志物比较 |
| 3.2.3 内皮细胞凋亡基因表达水平比较 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 重叠综合征所致全身多系统损伤的研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）抗凝血酶Ⅲ保护重症胰腺炎所致急性肾损伤的分子机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 绪论 |
| 第一部分 抗凝血酶Ⅲ活性与重症急性胰腺炎患者AKI发生率的关系研究 |
| 1.引言 |
| 2.研究方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 统计方法 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 低ATⅢ活性的重症急性胰腺炎患者有更高的AKI发生率 |
| 3.2 ATⅢ活性降低的程度与重症急性胰腺炎患者AKI发病率相关 |
| 4.讨论 |
| 第二部分 抗凝血酶Ⅲ保护重症急性胰腺炎所致AKI的分子机制研究 |
| 1.引言 |
| 2.实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 动物实验 |
| 2.3 体外实验 |
| 2.4 血清肌酐测定 |
| 2.5 血尿素氮测定 |
| 2.6 脂类过氧化作用(MDA)检测 |
| 2.7 总SOD活性检测(WST-8 法) |
| 2.8 肾组织石蜡包埋 |
| 2.9 肾组织PAS染色(过碘酸雪夫染色,糖原染色) |
| 2.10 免疫组织化学染色 |
| 2.11 Western blot检测蛋白 |
| 2.12 RT-PCR检测目的基因表达 |
| 2.13 统计分析 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 ATⅢ减轻重症急性胰腺炎导致的肾功能损伤 |
| 3.2 ATⅢ改善重症急性胰腺炎导致的肾脏组织学损伤 |
| 3.3 ATⅢ减轻重症急性胰腺炎大鼠的肾脏炎症反应 |
| 3.4 ATⅢ减轻重症急性胰腺炎大鼠的肾脏氧化应激 |
| 3.5 ATⅢ减轻重症急性胰腺炎大鼠的肾脏细胞凋亡 |
| 3.6 ATⅢ抑制近曲小管上皮细胞TNFα诱导的趋化因子表达 |
| 4.讨论 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 学术论文和科研成果 |
（9）化瘀解毒法对早期老年糖尿病足患者炎性因子的影响研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| abstract |
| 引言 |
| 临床研究 |
| 一、临床资料 |
| (一)病例来源 |
| (二)诊断标准 |
| (三)纳入标准 |
| (四)排除标准 |
| (五)病例剔除或脱落标准 |
| (六)终止试验标准 |
| 二、研究方法 |
| (一)治疗方法 |
| (二)观察指标及方法 |
| (三)疗效判定标准: |
| (四)安全性评价标准 |
| (五)数据处理 |
| 三、研究结果 |
| (一)三组患者治疗前一般情况分析 |
| (二)治疗后疗效性指标分析 |
| (三)安全性观察 |
| 讨论 |
| 一、糖尿病足中医病因病机的认识 |
| 二、化瘀解毒法对糖尿病足的作用机制 |
| (一)化瘀解毒方组成 |
| (二)组方依据及方药分析 |
| (三)化瘀解毒法对炎性因子的影响 |
| (四)化瘀解毒法对微栓子的影响 |
| 三、糖尿病足西医发病机制的认识 |
| 四、中医治疗糖尿病足的认识 |
| 五、西医治疗糖尿病足的认识 |
| (一)一般治疗 |
| (二)糖尿病足内科治疗 |
| (三)糖尿病足外科治疗 |
| 六、阿司匹林在治疗糖尿病足中的应用及局限性 |
| 七、微栓子检测在临床中的应用 |
| 八、疗效分析 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附表 |
| 致谢 |
| 发表论文 |
（10）炎症细胞因子对深静脉血栓形成的影响及中药干预机制的研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 临床研究 |
| 技术路线图 |
| 临床研究之一 炎症细胞因子在DVT 病程中变化规律的研究 |
| 一、研究对象 |
| （一） 病例来源 |
| （二） 诊断标准 |
| （三） 病例选择标准 |
| 二、研究方法 |
| （一） 病例分组 |
| （二） 观察指标 |
| （三） 检测方法 |
| （四） 统计方法 |
| 三、临床资料分析 |
| （一） 性别 |
| （二） 年龄 |
| （三） 发病部位 |
| （四） 临床分型 |
| 四、DVT 不同病程的炎症细胞因子检测结果 |
| （一） 血清CRP 的检测结果 |
| （二） 血清TNF-Α的检测结果 |
| （三） 血清IL-1Β的检测结果 |
| （四） 血清IL-6 的检测结果 |
| （五） 血清IL-8 的检测结果 |
| （六） 血清IL-10 的检测结果 |
| （七） DVT 组内各细胞因子间的相关性分析 |
| （八） 促炎因子与抗炎因子的比率变化 |
| 临床研究之二 炎症细胞因子与DVT 中医证型相关性的研究 |
| 一、研究对象 |
| （一） 病例来源、西医诊断标准、病例选择标准均同临床研究之一 |
| （二） 中医辨证分型诊断标准 |
| 二、研究方法 |
| （一） 病例分组 |
| （二） 观察指标、检测方法、统计方法均同临床研究之一 |
| 三、临床资料分析 |
| （一） 性别 |
| （二） 年龄 |
| （三） 发病部位 |
| （四） 临床分型 |
| （五） 诱发因素 |
| 四、DVT 中不同中医证型的炎症细胞因子检测结果 |
| （一） 血清CRP 的检测结果 |
| （二） 血清TNF-Α的检测结果 |
| （三） 血清IL-1Β的检测结果 |
| （四） 血清IL-6 的检测结果 |
| （五） 血清IL-8 的检测结果 |
| （六） 血清IL-10 的检测结果 |
| 第二部分 实验研究 |
| 技术路线图 |
| 一、实验材料 |
| （一） 实验动物 |
| （二） 实验主要试剂 |
| （三） 实验主要仪器 |
| （四） 实验主要器械和材料 |
| （五） 实验药物 |
| 二、实验方法 |
| （一） 实验分组 |
| （二） 用药剂量及给药方式 |
| （三） 造模方法 |
| （四） 取材方法 |
| （五） 检测指标 |
| （六） 血清学炎症细胞因子的检测方法 |
| （七） 光镜切片的制备方法 |
| （八） 光镜下观察指标的结果判定方法 |
| （九） 扫描电子显微镜标本的制备方法 |
| （十） 扫描电子显微镜标本样品的内皮损伤分级 |
| （十一） 统计方法 |
| 三、实验结果 |
| （一） DVT 大鼠模型成功建立 |
| （二） 各中药治疗组对血清TNF-Α、IL-6、IL-8 水平的影响 |
| （三） 各中药治疗组对静脉内皮病理改变的影响 |
| （四） 各中药治疗组对静脉壁中炎性细胞的影响 |
| （五） 各中药治疗组对静脉壁中TNF-Α、IL-10、E-选择素表达的影响 |
| （六） 各中药治疗组对静脉壁中NF-ΚBP65MRNA 表达的影响（见表37，图29） |
| 讨论 |
| 一、现代医学对深静脉血栓形成病因及发病机制的认识 |
| （一） DVT 病因理论的新内涵 |
| （二） 炎症与DVT 发病密切相关的理论研究 |
| （三） 本研究涉及的炎症细胞因子与DVT 的相关性 |
| 二、炎症细胞因子在DVT 病程中的变化规律及其意义探讨 |
| （一） 促炎症细胞因子在DVT 病程中的变化规律及意义探讨 |
| （二） 抗炎症细胞因子IL-10 在DVT 中的变化规律及意义探讨 |
| （三） DVT 中炎症细胞因子之间相关性关系的探讨 |
| （四） DVT 中促炎因子与抗炎因子平衡关系的探讨 |
| 三、下肢深静脉血栓形成中医病因病机探讨 |
| （一） 古代医家对下肢深静脉血栓形成病因病机的认识 |
| （二） 现代医家对下肢深静脉血栓形成中医病因病机的认识 |
| 四、下肢深静脉血栓形成中医辨证分型的研究 |
| 五、瘀热互结在下肢深静脉血栓形成病因病机中的作用探讨 |
| （一） 瘀热互结学说的理论探讨 |
| （二） 瘀热互结在下肢深静脉血栓形成病因病机中的作用 |
| 六、炎症细胞因子和DVT 中医辨证分型的关系探讨 |
| 七、清热解毒、凉血化瘀是下肢深静脉血栓形成的重要治法 |
| 八、本研究对动物模型和实验药物的选择及意义 |
| （一） 深静脉血栓形成动物模型的建立 |
| （二） 实验药物的选择及意义 |
| 九、花栀通脉片的组成与方义 |
| （一） 花栀通脉片组成 |
| （二） 药物功效溯源 |
| （三） 方解 |
| （四） 花栀通脉片组成药味的现代药理学研究 |
| 十、各中药治疗组对深静脉血栓形成的干预机制研究探讨 |
| （一） 各中药治疗组改善静脉血栓形成的病理损害 |
| （二） 各中药治疗组减少DVT 大鼠血清促炎症细胞因子生成和释放 |
| （三） 各中药治疗组抑制血管壁炎性细胞的浸润 |
| （四） 各中药治疗组抑制静脉壁中TNF-Α的表达 |
| （五） 各中药治疗组调节静脉壁中IL-10 的表达 |
| （六） 各中药治疗组抑制静脉壁中E-选择素的表达 |
| （七） 各中药治疗组抑制静脉壁中NF-ΚBP65MRNA 的表达 |
| 十一、本研究创新点以及不足之处 |
| （一） 本研究的创新点 |
| （二） 本研究的不足之处 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 发表论文及着作 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 科技查新报告 |
| 详细摘要 |
四、髋部和骨盆骨折患者肿瘤坏死因子-α、粘附分子-1的测定及其与静脉血栓形成的关系（论文参考文献）
- [1]NLRP3/IL-1/NF-κB信号通路及IL-1基因多态性在VTE中作用及机制研究[D]. 热甫开提·阿不都哈力克. 新疆医科大学, 2021
- [2]具有活性氧和剪切应力双重响应药物递送系统及用于动脉粥样硬化治疗的研究[D]. 沈美丽. 吉林大学, 2021(01)
- [3]丹参多酚酸通过小胶质细胞P2X7/NLRP3/GSDMD通路减轻实验性脑缺血再灌注损伤研究[D]. 马岱朝. 辽宁中医药大学, 2021(02)
- [4]基于差异表达的LncRNA TUG1研究小陷胸加味汤治疗冠心病（痰热互结证）的作用机制[D]. 周芳. 湖北中医药大学, 2021(01)
- [5]消栓通脉汤介导microRNA-181b调控NF-κB信号通路干预深静脉血栓形成的机制研究[D]. 庞雪. 山东中医药大学, 2020(01)
- [6]TNF-α在深静脉血栓形成中的作用及其机制研究[D]. 李达. 苏州大学, 2020(06)
- [7]OS模式VEC损伤、PMN与VEC交互作用及干预的研究[D]. 肖凡. 天津医科大学, 2019(02)
- [8]抗凝血酶Ⅲ保护重症胰腺炎所致急性肾损伤的分子机制[D]. 孔一帏. 上海交通大学, 2019(06)
- [9]化瘀解毒法对早期老年糖尿病足患者炎性因子的影响研究[D]. 张婷. 山东中医药大学, 2018(01)
- [10]炎症细胞因子对深静脉血栓形成的影响及中药干预机制的研究[D]. 张玥. 山东中医药大学, 2007(03)